ICS DB1304 邯 郸 市 地 方 标 准 DB 1304/ T417—2022 噬菌体防控鸡源沙门菌技术规程 2022 - 12 - 29发布 2022 - 12 - 30实施 邯郸市市场监督管理局 发 布 DB1304/ T417 —2022 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1－2020 给出的规则起草。 本文件由河北工程大学提出。 本文件起草单位：河北工程大学、峰峰矿区市场监督管理局 。 本文件主要起草人：钟翠红、马金波、张彦昌、程瑞、杨利、朱阵、宿欣、袁英、吴丽丽、刘金霞、 汲如芬、王海忠、支龙彬。 DB1304/ T417 —2022 1 噬菌体防控鸡源沙门菌技术规程 1 范围 本文件规定了鸡源沙门菌及其噬菌体分离鉴定、噬菌体悬浮液的制备、防控措施等技术要求。 本文件适用于鸡源沙门菌的噬菌体预防和治疗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4789.4 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 N Y/ T 388 畜禽养殖场环境质量标准 NY/T541 动物疫病实验室检验采样方法 NY/T555 动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法 NY/T 1948 兽医实验室生物安全要求通则 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 沙门菌的分离鉴定 参照NY/T 541 采集样品后，按照 GB 4789.4-2016 分离鉴定沙门菌。 5 噬菌体混悬液的制备 5.1 污水采集与处理。从养鸡场污水管道采集污水样品，8000 r/min 离心 15 min，取上清液，弃沉淀， 经 0.22 μm 微孔滤器过滤，滤液备用。 5.2 噬菌体的分离纯化。将鉴定的沙门菌作为诱导菌，利用双层琼脂平板法培养噬菌体，挑选大小一 致噬菌斑，再利用双层琼脂平板法纯化培养噬菌体。吸取噬菌体纯化液，加至电镜专用铜网上，用 2% 醋酸铀染色，干燥，通过透射电子显微镜观察噬菌体超微结构。再利用双层琼脂平板法对具有典型形态 特征的噬菌体进行纯化。 5.3 宽谱噬菌体的筛选。将鉴定的沙门菌菌液接种于双层平板，静置，再取噬菌体悬液滴于双层琼脂 平板上，倒置于 37 ℃恒温箱中，过夜培养，观察双层琼脂平板是否形成噬菌斑，根据噬菌体吞噬不同 种类病原菌菌株的数量筛选宽谱噬菌体。