ICS 71.100.70 Y42 T/SDAQI 团体标准 T/SDAQI 006—2021 化妆品中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的测定 高效液相色谱法 Determination of adenosine cyclic phosphate and guanosine cyclic monophosphate in cosmetics —High performance liquid chromatography 2021 - 09-25发布 2021 -10 - 25实施 山东质量检验协会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 006 —2021 I 版权说明 本文件系由山东质量检验协会 （简称“协会” ）组织创制的团体标准文本 （含制定 过程中的草案）， 协会拥有本文件的著作权，受《中华人民共和国著作权法》保护。除法律所允许的情形或事先得到协会 书面许可外，任何组织和个人不得以任何理由进行复制、销售、传播本文件，或抄袭、歪曲本文件等侵 权行为，否则，行为人应承担相应的民事、行政责任，构成犯罪的，将依法追究其刑事责任。其他文件 引用本文件，不属侵权行为。 凡利用本文件进行或支持贸易、认证等商业活动，应事先购买正式文本或得到协会书面授权。购买 本文件或获得授权，请与协会联系。 欢迎社会各界举报侵权盗版行为，协会将依法严格保护举报人信息。 联系人：范红梅 联系电话： 0531-89701986 15668365153 联系邮箱： [email protected] 协会对本版权声明拥有最终解释权。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 006 —2021 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东质量检验协会提出并归口。 本文件起草单位： 山东省产品质量检验研究院、山东省农村信用社联合社、滨州市食品药品检验检 测中心、山东福瑞达生物工程有限公司 。 本文件主要起草人： 周莉莉、高伟、李法杰、侯广月、杜营、刘忠强、王一村、孔蒙、刘丽洁、刘 倩、吴玲娟、徐正、杨素珍、张瑞、贺志乔、韩婷婷 。 本文件的所有权和解释权归山东质量检验协会。 如果您在本文件使用中发现错误或技术内容有不当之处，请及时与协会秘书处联系，将意见发送到 [email protected] 。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 006 —2021 1 化妆品中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了化妆品中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷测定的高效液相色谱法。 本文件适用于化妆品中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的环磷酸腺苷 和环磷酸鸟苷 用乙腈水溶液提取，经水饱和正己烷除去脂肪，离心、过膜，采 用高效液相色谱仪测定，保留时间定性，峰面积外标法定量。 5 试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1 环磷酸腺苷标准品 （CAS：60-92-4）：纯度 ≥98.5%。 5.2 环磷酸鸟苷标准品（ CAS：7665 -99-8）：纯度 ≥98%。 5.3 乙腈：色谱纯。 5.4 甲酸：色谱纯。 5.5 正己烷：分析纯 。 5.6 乙腈水溶液（ 10%，体积比）：量取 10 mL乙腈，加水 90 mL，充分混匀。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 006 —2021 2 5.7 水饱和正己烷：取 200 mL正己烷（ 5.5）于 250 mL分液漏斗中，加入过量的水，剧烈振荡，静 置分层后，弃去下层水层即得。 5.8 甲酸水溶液 （0.1%）：准确移取 1 mL甲酸（ 5.4），加入适量水溶解，用水定容至 1000 mL。经 0.22 μm微孔滤膜过滤后备用。 5.9 环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷混合标准储备液：分别准确称取 0.01g（精确至 0.1 mg）环磷酸腺苷和 环磷酸鸟苷标准品，用水溶解并定容至 10mL，配制成浓度为 1 mg/mL 的混合标准储备液， 1 ℃～4 ℃ 冷藏保存，有效期 3个月。 6 仪器设备 6.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 6.2 电子分析天平：感量分别为 0.1 mg和0.001 g。 6.3 超声波清洗器。 6.4 涡旋混合器。 6.5 离心机，转速不低于 6 000 r/min 。 7 试验步骤 7.1 试样处理 7.1.1 液态化妆品 称取混合均匀试样 1.0 g（精确至 0.001g），置于 50 mL具塞离心管中，准确加入 25.00 mL 乙腈水 溶液（ 5.6），涡旋混合均匀，超声提取 25 min，6 000 r/min 离心 5 min，取上清液经微孔滤膜过滤后上 机测定。 7.1.2 乳、膏、霜类化妆品 称取混合均匀试样 1.0 g（精确至 0.001g），置于 50 mL具塞离心管中，准确加入 25.00 mL 乙腈水 溶液（ 5.6），涡旋混合均匀，超声提取 25 min，6 000 r/min 离心 5 min，取上清液经微孔滤膜过滤后上 机测定；若离心后上清液仍浑浊的样品，以 7.1.3进行试样提取。 7.1.3 部分膏霜类化妆品 称取混合均匀试样 1.0 g（精确至 0.001 g）于 50 mL具塞离心管中，准确加入 25.00 mL 乙腈水溶液 （5.6），涡旋混合均匀，超声提取 25 min，加入 10 mL水饱和的正己烷（ 5.7），涡旋，离心，去除上 层正己烷层。仍为浑浊可在水层溶液中再加入 10 mL水饱和的正己烷（ 5.7），涡旋，离心，弃去正己 烷层，取水溶液经微孔滤膜过滤后上机测定。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 006 —2021 3 7.2 液相色谱参考条件 7.2.1 色谱柱： C18 柱， 4.6× 250 mm，5 μm，或其他等效色谱柱。 7.2.2 流动相：乙腈（ 5.3）+甲酸水溶液（ 5.8）=5+95（体积比）。 7.2.3 流速： 1.0 mL /min 。 7.2.4 柱温： 35 ° C。 7.2.5 进样量： 10 μL。 7.2.6 检测波长： 254 nm。 7.3 标准工作曲线制作 将标准储备液 （ 5.9） 用水稀释制备一系列标准溶液， 标准系列浓度为 0.5μg/mL 、1 μg/mL、10 μg/mL 、 20 μg/mL 、50 μg/mL 、100 μg/mL ，临用前现配。按色谱条件（ 7.2）进行测定，以色谱峰的峰面积为纵 坐标，对应的溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。 7.4 试样的测定 将试样溶液（ 7.1）按色谱条件（ 7.2）进行测定，保留时间定性，依据测得峰面积，根据标准曲线 得到试样测定溶液中待测物浓度。 8 分析结果的表述 试样中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的含量分别按式（ 1）计算： mVcX= ----------- (1) 式中： X——试样中待测组分的含量，单位为毫克每千克（ mg/kg）； c——试样溶液中环磷酸腺苷或环磷酸鸟苷的浓度，单位为微克每毫升 (μg/mL)； V——试样体积，单位为毫升（ mL）； m——试样质量，单位为克（ g）； 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。 10 其他 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 006 —2021 4 当称样量 1g时，本标准环磷酸鸟苷的方法检出限为 10 mg/kg ，定量限为 30 mg/kg。环磷酸腺苷的方 法检出限为 5 mg/kg，定量限为 15 mg/kg。 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 006 —2021 5 附录 A （资料性） 环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷标准溶液 液相色谱图 A 图A. 环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷 标准溶液液相色谱图 环磷酸腺苷 - 6.260 环磷酸鸟苷 - 7.523AU 0.0000.0050.0100.0150.0200.0250.0300.035 分钟0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50