ICS 65.100.01 CCS B 17 团 体 标 准 T / N A I A 0 2 6 —2 0 2 1T/ NAIA 0119-2022 枸杞中螺虫乙酯及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of spirotetramat and its metabolites residues in wolfberry Liquid chromatography-mass spectrometry 2022-04-27发布 2022-05-01实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布TB 全国团体标准信息平台 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏食品检测研究院、宁夏 化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：杨静、牛艳、王晓菁、吴燕、苟春林、刘霞、赵子丹、张锋锋、陈 翔、开建荣、杨春霞、王彩艳、王芳、赵丹青、张学玲、张小飞。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 枸杞中螺虫乙酯及其代谢物残留量的测定 液相色谱 -质谱 /质谱法 1 范围 本文件规定了枸杞中螺虫乙酯及其代谢物残留量的液相色谱 -质谱 /质谱测定方法。 本文件适用于枸杞中螺虫乙酯及其代谢物的液相色谱 -质谱 /质谱法测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期 的引用文件， 仅该日期对应的版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所 有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 螺虫乙酯及其代谢物 spirotetramat and its metabolites 螺虫乙酯是一种具有双向内吸传导性能的现代杀虫剂 ，有四种代谢产物 ，分别为螺虫乙 酯烯醇（ spirotetramat-enol ）、螺虫乙酯羟基酮（ spriotetramat-keto-hydroxy ）、螺虫乙酯烯 醇 葡 萄 糖 苷 （ spriotetramat-enol-glucoside ） 和 单 羟 基 螺 虫 乙 酯 （spirteteramat-mono-hydroxy ）。 4 原理 试样用 0.1%甲酸乙腈提取，用石墨化炭黑（ GCB）和N-丙基乙二胺固相萃取（ PSA） 分散净化，用液相色谱 -质谱 /质谱仪检测和确证，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合 GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 乙腈（ CH 3CN）：色谱纯。 5.2 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 5.3 甲酸（ CH 2O2）：色谱纯。 5.4 氯化钠（ NaCl）：分析纯。 全国团体标准信息平台 5.5 N-丙基 -乙二胺吸附剂（ PSA）： 40 µm～63 µm。 5.6 石墨化炭黑（ GCB）： 120～400目。 5.7 农药标准品：螺虫乙酯（ CAS号203313-25-1 ，纯度 98.86%）、螺虫乙酯烯醇（ CAS 号203312-38-3 ，纯度 99.12%） 、螺虫乙酯羟基酮（ CAS号187166-40-1 ，纯度 98.1 %） 、螺虫乙酯烯醇葡萄糖苷（ CAS号1172614-86-6 ，纯度 95.70%）、单羟基螺虫乙 酯（ CAS号1172134-11-0 ，纯度 94.24%）。 5.8 标准溶液配制 5.8.1 螺虫乙酯及其代谢物标准储备溶液：分别准确称取适量的螺虫乙酯及其代谢物标准品 （精确至 0.01 mg），用甲醇溶解 ，分别配制成 1000 mg/L的标准储备溶液 ，-18 ℃下保 存。 5.8.2 螺虫乙酯及其代谢物混合标准中间溶液：根据需要分别取适量螺虫乙酯及其代谢物的 标准储备液， 用乙腈稀释成 10 mg/L标准中间溶液， -18 ℃下保存。 5.9 0.1%甲酸乙腈溶液（体积分数）。 5.10 0.1%甲酸溶液（体积分数）。 6 仪器与设备 6.1 高效液相色谱 -质谱 /质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）。 6.2 分析天平： 感量 0.01 g和0.0001 g。 6.3 组织捣碎机。 6.4 高速万能粉碎机： 10000 r/min。 6.5 振荡器。 6.6 离心机： 4000 r/min。 6.7 涡旋混合器。 6.8 离心管： 50 mL，塑料。 6.9 滤膜： 0.22 μm，有机相。 7 分析步骤 7.1 试样的制备 鲜、干枸杞样品于 -18 ℃冷冻冰箱中保存。试验时将鲜、干枸杞样品取出，鲜样用高速 组织捣碎机打浆 ，干样用高速万能粉碎机 （可加少量的液氮 ）粉碎（30 g样品粉碎时间为 30 s），分别置于样品瓶中， -18 ℃冷冻备用。 7.2 样品提取与净化 7.2.1 鲜果 称取试样 10.00 g（精确至 0.01 g）于50.0mL离心管， 加入 20.0 mL0.1%甲酸乙腈溶液 （5.9），在振荡器上震荡 40 min，加入 5.0 g氯化钠，盖上盖子， 振摇约 1 min，放入离心 全国团体标准信息平台 机，4000 r/min离心 5 min，吸取 2 .00mL上清液于 15.0 mL离心管中 （提前称好 50 mgPSA 和10 mgGCB）涡旋净化后过 0.22 μm滤膜，用液相色谱 -质谱 /质谱测定。 7.2.2 干果 称取试样 5.00 g（精确至 0.01 g）于50.0 mL离心管， 加水 10.0 mL复溶 30 min，加入 20.0 mL0.1%甲酸乙腈溶液（ 5.9），在振荡器上震荡 40 min，加入 5.0 g氯化钠，盖上盖子 ， 振摇约 1 min，放入离心机 ，4000 r/min离心 5 min，吸取 2.00 mL上清液于 15 mL离心管中 （提前称好 50 mgPSA和10 mgGCB）涡旋净化后过 0.22 μm滤膜，用液相色谱 -质谱 /质谱 测定。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18柱， 150 mm×2.1 mm（i.d）， 3.5 μm，或性能相当者。 b）柱温： 35 ℃。 c）流速： 0.4 mL/min。 d）流动相： A相为 0.1%甲酸溶液（ 5.10）， B相为乙腈， 梯度洗脱条件见表 1。 e）进样量： 2.0μL。 表1 流动相及其梯度条件（ VA+VB） 时间 (min) 流 速 (mL/ min) VA(%) VB(%) 0.00 0.3 90 10 3.00 0.3 50 50 7.00 0.3 50 50 11.00 0.3 90 10 12.00 0.3 10 90 15.00 0.3 10 90 7.3.2 质谱参考条件 a）离子源类型：电喷雾离子源； b）扫描方式：选择离子监测模式； c）电喷雾电压： 3.5kV； d）毛细管传输温度： 300 ℃； e）碰撞压力： 1.5 mTorr； f）鞘气： 30 arb； g）辅气： 10 arb。 表2 螺虫乙酯及其代谢物的多反应离子监测分析参数 名称 保留时间 /min 定性离子对 /m/z 定量离子对 /m/z 滞留时间 /s 碰撞能量 /eV 全国团体标准信息平台 螺虫乙酯 spirotetramat 7.06 374.1/216.1 374.1/302.1 374.1/302.1 0.1 0.1 12 10 螺虫乙酯烯醇 s-enol 4.77 302.1/216.1 302.1/268.1 302.1/268.1 0.1 0.1 20 20 螺虫乙酯羟基酮 s-keto 5.06 318.1/268.1 318.1/300.2 318.1/268.1 0.1 0.1 18 18 螺虫乙酯烯醇葡萄 糖苷 s-glu 3.03 464.2/270.1 464.2/302.1 464.2/302.1 0.1 0.1 29 29 单羟基螺虫乙酯 s-mono 4.49 304.1/254.1 304.1/272.1 304.1/254.1 0.1 0.1 14 12 7.3.3 色谱测定与确证 根据试样中被测物的含量情况 ，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析 。标准工作 液和试样中被测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述仪器条件下， 螺虫乙酯、 螺虫乙酯烯醇 、螺虫乙酯羟基酮 、螺虫乙酯烯醇葡萄糖苷 、单羟基螺虫乙酯的保留时间分别 约为 7.06、4.77、5.06、3.03、4.49min，选择离子监测色谱图参见附录 A。按照上述条件进 行样品测定 ，若检测样品的色谱峰保留时间与标准品一致 ，且与浓度相当标准工作溶液的相 对丰度一致 ，相