ICS 65.020.30 B 44 DB22 吉 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 2599—2016 梅花鹿精液采集及冷冻技术规程 Technical specification of semen collecting and frozening in sika deer 2016 - 12 - 22 发布 吉林省质量技术监督局 2017 - 04 - 01 实施 发 布 DB22/T 2599—2016 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院特产研究所。 本标准主要起草人：赵伟刚、魏海军、许保增、杨镒峰、赵蒙、陈秀敏、曹新燕、鞠妍、薛海龙。 I DB22/T 2599—2016 梅花鹿精液采集及冷冻技术规程 1 范围 本标准规定了梅花鹿精液采集前准备、稀释液配制、电刺激采精、精液处理及冷冻保存。 本标准适用于梅花鹿精液采集及冷冻生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5458 液氮生物容器 GB 6935 中国梅花鹿种鹿 GB 18596 畜禽养殖业污染物排放标准 NY 1181 输精细管 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 电刺激采精 Electrical stimulation ejaculations 利用电刺激采精仪获得公鹿精液的方法。 4 采精前准备 4.1 采精场所 采精场应设在距公鹿圈较近处，拨鹿安全方便，应宽敞、安静，地面清洁卫生。 4.2 采精员准备 采精员应剪短指甲，更换好工作服和鞋帽，戴上工作手套。 4.3 仪器设备 预先使冷藏柜平衡在4 ℃，恒温箱和水浴锅处于37 ℃工作状态,电刺激采精仪使用前应进行检查， 观察指示器是否正确。 5 稀释液 5.1 稀释液推荐配方 1 DB22/T 2599—2016 表 5.1 鹿冷冻精液稀释液推荐配方 成分 含量 Tirs 2.7 g 柠檬酸 1.53 g 葡萄糖 1.0 g 甘油 6.0 ml 双蒸水 定容至 100.0 mL 5.2 稀释液配制方法 先用电子天平称取 Tirs、柠檬酸和葡萄糖，放入三角烧瓶中，再把三角烧瓶放在电子天平上，归 零后直接用三角烧瓶称取甘油，用量桶量取双蒸水，倒入三角烧瓶中，并摇晃使药品充分溶解，放入蒸 锅内蒸汽灭菌30 min，冷却后取出待用。使用前加入20%卵黄和青霉素、链霉素各10万单位，用磁力搅 拌器充分搅拌均匀后放入3 ℃～5 ℃的冰箱中待用，放置时间不得超过24 h。 6 采精 6.1 种公鹿的要求 种公鹿应符合GB 6935的规定。 6.2 采精方法 采用电刺激采精仪进行梅花鹿精液采集，电刺激采精程序参见附录B。 6.3 采精频率 繁殖期内，成年公鹿每隔一周采精一次。 7 精液处理 7.1 精液品质评定 精液品质评定见表1。 表1 项目 内容 色泽 乳（灰）白色或淡黄色 精液品质评定参数表 pH 6.85～6.95 密度 活率 畸形率 8 ≥0.65 ≤15% ≥6×10 个/mL 7.2 精液稀释、分装与平衡 7.2.1 稀释 用37 ℃预热的稀释液对精液进行两次稀释。先进行半量稀释，10 min后再稀释至最终倍数。 7.2.2 分装 2 DB22/T 2599—2016 冷冻精液剂型为0.25 ml细管，细管应符合NY 1181的要求。精液稀释10 min后,用细管灌封仪进行 分装、标记和封口。每支细管含有效精子数1000万～1500万。 7.2.3 平衡 分装后的细管精液，用2 层～3 层干毛巾包裹后放入4℃冷藏柜中平衡3 h～4 h。 8 精液冷冻 8.1 冷冻方法 8.1.1 程序冷冻仪冷冻 按照程序冷冻仪的说明进行操作。如果冻精细管数量不足时，要填充备用塑料细管和细管架以保持 最佳冷冻曲线程序自动完成冷冻过程，确保冻精质量。 8.1.2 广口冷冻罐冷冻 将平衡好的细管精液均匀铺于冷冻架上，使冷冻架与液氮面保持2 cm～2.5 cm的高度，冷冻温度控 制在-120 ℃～-140 ℃，冷冻时温度回升的最高值不得高于-90 ℃， 5 min～8 min后将冷冻架浸入液 氮中。 8.2 冻精检查与保存 8.2.1 冻精检查 每批冻精抽样，在38℃温水中解冻后进行活率检查，活率大于0.3者视为合格。 8.3 冻精保存 冻精贮存于的液氮罐中，定期添加液氮，应保证冻精始终浸在液氮中，液氮罐应符合 GB/T 5458 的规定。 9 采精后的处理 废弃物处理应按照GB 18596的规定执行，采精后应及时清扫场地并用水冲洗干净。 3 DB22/T 2599—2016 AA 附 录 A （规范性附录） 梅花鹿电刺激采精程序 A.1 公鹿保定 将采精公鹿拨入保定器内保定，可辅以少量麻醉药物，使鹿呈站立状态。如无保定器，也可直接用 麻醉药物麻醉，呈全麻状态，使鹿体呈侧卧姿势。 A.2 公鹿处置 排除宿粪，用剪毛剪剪短尿道口附近的长毛，用刺激性较小的消毒剂或蒸馏水清洁尿道口部位，导 出阴茎并用纱布将龟头下端阴茎缠绕住（不要过紧），使龟头露出，然后用灭菌纱布擦干阴茎及龟头。 A.3 采精 将电极棒徐徐插入直肠15cm～20cm并使电极部位与直肠腹面接触，检查电压是否在零位。打开电压 开关，调节电压调节按钮使电压由低向高，并在每档通、断交替刺激5～10次，每次通电5～8秒，间断5～ 8秒，当电压升至射精档位时，在该档继续交替刺激直至射精完毕，也可再升一档电压刺激，使其充分 射精。用集精杯分段接取精液，注意更换集精杯，避免混进副性腺液或尿液。采精后的公鹿注射解药使 其苏醒。 4 DB22/T 2599—2016 BB 附 录 B （规范性附录） 鹿冷冻精液细管标记方法 B.1 细管冷冻精液标记 由十六位数四部分组成，排列顺序如下： a) 第一部分：公鹿冷冻精液生产单位代号三位数。 b) 第二部分：品种代号二位数。 c) 第三部分：冻精生产日期六位数。 d) 第四部分：公鹿号五位数。 第三部分冻精生产日期六位数按年月日顺序排列，年月日各占二位数字，年度的后两位数组成年的 二位数，月日不够二位的，月日前分别加“0”补充为二位数。第四部分公鹿号取该鹿号码的后五位数。 部分与部分之间空一个汉字（二个字节），第一、第二部分用汉语拼音大写字母表示。标记的字迹必须 清晰易认。 示例： 棉塞封口端 TCS JL 120616 09101 超声波封口端 TCS 为中国农业科学院特产研究所代号，JL 为吉林梅花鹿的品种代号，120616 为 2012 年 6 月 16 日的生产日期代号，09101 为该公鹿号码。 5 DB22/T 2599—2016 CC 附 录 C （规范性附录） 种公鹿精液采集及冷冻记录表 表C.1 采精 日期 采精人 采精 批次 品种 鹿号 色泽 种公鹿精液采集及冷冻记录表 鲜精 鲜精 采精 稀释 稀后 冻前 生产 冻后 活力 密度 量 总量 活力 活力 数量 活力 % 亿/mL mL % % 支 % mL _________________________________ 备注 1