(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111115305.3 (22)申请日 2021.09.23 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113789347 A (43)申请公布日 2021.12.14 (73)专利权人 徐州医科 大学 地址 221004 江苏省徐州市淮 海西路84 号 (72)发明人 柴大飞　郑骏年　王刚　李慧忠　 方琳　 (74)专利代理 机构 北京预立 生科知识产权代理 有限公司 1 1736 专利代理师 朱萍　孟祥斌 (51)Int.Cl. C12N 15/85(2006.01) C12N 15/12(2006.01) C12N 15/60(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61K 47/34(2017.01) A61K 47/36(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01)(56)对比文件 CN 108396 033 A,2018.08.14 CN 103948943 A,2014.07.3 0 CN 10970 5225 A,2019.0 5.03 CN 110678484 A,2020.01.10 CN 111542546 A,2020.08.14 WO 2017078318 A1,2017.0 5.11 Jun-Wu L i等人.Constructi on of a fusion expres sion plasmid containing. 《ONCOLO GY LETTERS》 .201 1, Youguang Zhao 等.Enhance the anti- renca carci noma effect of a DNA vac cine targeting G250 gene by co-expres sion with cytotoxic T-lymphocyte as sociated antigen-4(CTLA-4). 《Bi omedicine & Pharmacotherapy》 .2017,第90卷 Wenjing Qian等.Fibri nogen‑like protein 1 (FGL1):the next im mune checkpoint target. 《J Hemato l Oncol》 .2021, 第14卷(第1期), Strausberg,R.L.等.登录号： BC 021946.1. 《GenBan k》 .2006, 审查员 王启扬 (54)发明名称 FGL1/CAIX双靶点疫 苗在治疗肾癌和肾癌肺 转移中的应用 (57)摘要 本发明属于生物医学领域， 具体涉及FGL1/ CAIX双靶点疫苗在治疗肾癌和肾癌肺转移中的 应用技术领域。 本研究构建了表达FGL1和/或 CAIX的DNA疫苗， 通过体内外实验验证这种新型 疫苗在肾癌中的治疗效果， 并探讨其作用机制， 为肾癌和肾癌肺转移的免疫治疗提供新的途径， 也将为其临床应用奠定实验基础。 权利要求书2页 说明书10页 序列表4页 附图14页 CN 113789347 B 2022.07.22 CN 113789347 B 1.一种载体组合物， 其特 征在于， 所述载体组合物由以下两种载体组成： 包含编码FGL1基因的DNA的载体和包 含编码CAIX基因的DNA的载体， 所述编码FGL1基因的DNA的序列如SEQ  ID NO.:1所示， 所述编码CAIX基因的DNA的序列 如SEQ ID NO.:3所示。 2.如权利要求1所述的载体组合物， 所述载体为表达载体。 3.一种高表达FGL1基因和CAIX基因的宿主细胞， 所述FGL1基因编码的蛋白的氨基酸序 列如SEQ ID NO.:2所示， 所述CAIX基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ  ID NO.:4所示， 所 述宿主细胞 是动物细胞或人的细胞。 4.如权利要求3所述的宿主细胞， 所述宿主细胞 是人的免疫细胞。 5.一种治疗肾癌的核酸疫苗， 所述疫苗中含有编码FGL1基因的DNA和编码CAIX基因的 DNA， 所述编码FGL1基因的DNA的序列如SEQ  ID NO.:1所示， 所述编码CAIX基因的DNA的序列 如SEQ ID NO.:3所示。 6.如权利要求5所述的核酸疫苗， 所述疫苗中含有权利要求1所述的载体组合物。 7.如权利要求5所述的核酸疫苗， 其特 征在于， 所述疫苗中还 包括递送材料。 8.如权利要求7 所述的核酸疫苗， 其特 征在于， 所述 递送材料为高分子材 料或脂质体。 9.如权利要求8所述的核酸疫苗， 其特征在于， 所述高分子材料为PLGA、 PEI、 PLA、 PGA、 PTMC、 PLCL、 PEG或壳聚糖。 10.如权利要求8所述的核酸疫苗， 其特 征在于， 所述高分子材 料是PLGA和/或PEI。 11.表达FGL1和CAIX 的物质在制备促进树突细胞成熟、 增强CD8+ T细胞的免疫反应、 治 疗肾癌、 治疗肾癌转移的疫苗中的应用， 所述表达FGL1和CAIX的物质选自以下任意 一种： 1） 编码FGL1基因的DNA和编码CAIX基因的DNA； 2） FGL1基因编码的蛋白和CAIX基因编码的蛋白； 3） 权利要求1或2所述的载体组合物； 4） 权利要求3或4所述的宿主细胞； 5） 权利要求5 ‑10任一所述的核酸疫苗； 所述编码 FGL1的DNA的序列如SEQ  ID NO.:1所示， 所述编码CAIX的DNA的序列如SEQ  ID  NO.:3所示， 所述FGL1基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ  ID NO.:2所示， 所述CAIX基因编 码的蛋白的氨基酸序列如SEQ  ID NO.:4所示。 12.如权利要求11所述的应用， 其特征在于， 所述肾癌 转移为肾癌骨转移、 肾癌 肝转移、 肾癌肺转移或肾癌脑转移。 13.制备表达FGL1基因和CAIX基因的疫苗的方法， 其特征在于， 所述方法包括将以下至 少一种与递送材 料混合； 1） 编码FGL1基因的DNA和编码CAIX基因的DNA； 2） FGL1基因编码的蛋白和CAIX基因编码的蛋白； 3） 权利要求1所述的载体组合物； 所述编码FGL1基因的DNA的序列如SEQ  ID NO.:1所示， 所述编码CAIX基因的DNA的序列 如SEQ ID NO.:3所示， 所述FGL1基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ  ID NO.:2所示， 所述 CAIX基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ  ID NO.:4所示。 14.如权利要求13所述的方法， 其特 征在于， 所述 递送材料为高分子材 料或脂质体。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 113789347 B 215.如权利要求14所述的方法， 所述高分子材料为PLGA、 PEI、 PLA、 PGA、 PTMC、 PLCL、 PEG 或壳聚糖。 16.如权利要求14所述的方法， 所述高分子材 料是PLGA和/或PEI。 17.如权利要求13所述的方法， 其特征在于， 所述疫苗是权利要求5 ‑10任一所述的治疗 肾癌的核酸疫苗。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 113789347 B 3