的 ICS.65.020 DB5206 B 43 铜 仁 市 地 方 标 准 DB 5206/T 01-2018 代替DB 522200/T 114-2011 铜仁市猪人工授精技术操作规程 Tongren City of Pig artificial insemination technology operating rules 2018-12-06 发布 铜仁市质量技术监督局 发布 2018-12-06 实施 DB 5206/T 01-2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1－2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的 规则起草。 本标准代替DB 522200/T 114—2011《铜仁地区猪人工授精技术操作规程》。本标准与 DB 522200/T 114—2011相比除编辑性修改外主要差异如下： ——修改了本标准适用范围见1； ——修改了种公猪来源见2.2； ——增加了已本交配种的公猪可进行采精调教见3.1； ——修改了种公猪的调教时间见3.3； ——增加了假母猪台安全栏的设置见4.1.1； ——修改了种公猪的准备见4.1.5； ——修改了种公猪的采精方法见4.2； ——增加了精子活力压片检测方法操作要求见5.5； ——修改了精液的分装见6.2； ——修改了精液的保存见6.3； ——修改了输精前的准备见7.4； ——修改了输精方法见7.5。 本标准由铜仁市农业委员会提出并归口。 本标准起草单位：铜仁市畜牧技术推广站、松桃县、思南县、碧江区、印江县、玉屏县、 万山区、江口县、德江县、沿河县、石阡县畜牧技术推广站。 本标准主要起草人：毛同辉、李华磊、龙真权、冉隆权、郑晓刚、任明晋、樊蓉、石建 华、黄仁芳、郭义军、裴毅敏、王华、熊凤兰、袁豪、张长军、姚建军、崔宇林、刘运飞、 杨礼、邓万红、杨小碎。 本标准的历次版本发布情况为： ——DB 522200/T 114-2011 I DB 5206/T 01-2018 铜仁市猪人工授精技术操作规程 1 范围 本标准规定了猪人工授精技术各个环节，包括种公猪的品种与来源、调教、采精，精液 的品质检查、稀释、分装、保存、运输和输精。 本标准适用于铜仁市猪人工授精站（点）、养猪场（大户） 。 2 种公猪的品种与来源 2.1 品种 国外引进品种: 杜洛克猪、大约克猪、长白猪等；地方优良品种：江口萝卜猪、黔东花 猪、黔北黑猪等。 2.2 来源 种公猪必须从取得《种畜禽生产经营许可证》的种猪场或有资质的种猪测定站引进，经 种猪测定站或县以上畜牧行政主管部门审定及检疫符合种公猪标准，并有种猪合格证、免疫 证、检疫证和系谱卡。 3 种公猪的调教 3.1 调教年龄 国外引进品种 7～8 月龄，地方优良品种 5～6 月龄，已本交配种的公猪也可进行采精调 教。 3.2 调教方法 3.2.1 刺激法 在假母猪台后端涂抹发情母猪的阴道分泌物、尿液等，以诱发公猪性欲。训练人员发出 仿声信号，并辅以阴囊按摸，诱导公猪爬跨并完成射精。 3.2.2 观摩法 调教好的公猪采精时，让待训公猪观摩，激发性欲，待前者采精完后，再调教待训公猪 爬跨。 3.2.3 诱导法 用麻袋覆盖发情母猪，不露肢体，只露外阴户，激发公猪性欲，待公猪性欲高涨后，迅 速赶开母猪，诱导公猪爬跨假母猪台并辅以阴囊按摸，完成射精。 3.3 调教次数 每日早、晚各调教一次，每次调教的时间 10min～15min。 3.4 种公猪的利用年限 用于人工授精的种公猪一般利用年限为 3～4 年。 1 DB 5206/T 01-2018 4 采精 4.1 采精前的准备 4.1.1 采精室的准备 采精室要求长 4m～4.5m、宽 3m～3.5m，水泥地面，并进行过防滑处理；室内设立假母 猪台以及喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备；假母猪台两边各设置安全栏。采精室不能堆放其 他杂物，应保持清洁、卫生、安静、蔽光。 4.1.2 假母猪台的准备 假母猪台自制。自制假母猪台可用一个直径为 20～25cm、长 120～125cm 的圆木，两端 削成弧形，安装四条腿，在木头上面铺一层稻草或旧棉胎等有弹性的软物，外面包一层软胶 皮或猪皮(亦可用铁支焊接为半圆，四条腿能活动的假母猪台)。组装后假母猪台前高 60～ 70cm，后高 50～60cm。 4.1.3 器械的清洗和消毒 猪人工授精常用器械见附录 A。胶质器械用洗涤剂洗净晾干后，使用前用 75%的酒精消 毒。玻璃、搪瓷、金属等器械用洗涤剂晾干后，置于 160℃～200℃干燥箱消毒 30min～60min。 集精杯在采精前用稀释液冲洗一次，然后在集精杯上覆盖四层纱布，用橡皮筋套牢，置于 37℃恒温箱中备用。 4.1.4 采精人员的准备 采精人员应身体健康，采精前剪短指甲并磨平，用肥皂洗手后擦干并消毒，穿上洁净工 作服，戴上一次性塑料手套。 4.1.5 种公猪的准备 采精之前，剪去公猪包皮部的长毛，防止操作时抓住阴毛和阴茎而影响阴茎的勃起，用 0.1%高锰酸钾溶液对包皮进行消毒并用毛巾擦干，避免采精时残液滴入或流入精液中导致污 染。 4.2 采精方法 采精人员左手持集精杯站在假母猪台的左后方，右手挤出公猪包皮积尿，待种公猪爬上 假母猪台，伸出阴茎时，立即用右手握住种公猪阴茎前端螺旋部，并顺势将阴茎抽出包皮， 然后用生理盐水将阴茎冲洗干净，用拇指按摩阴茎前端以增加快感，当种公猪静伏射精时， 右手应有节奏地加压刺激种公猪性欲。种公猪最先射出的精液混有尿液等污物，不要收集， 等射出乳白色精液时即可收集。采精中间种公猪会稍停 1 min～2 min，然后又接着射精， 种公猪射精一般分 2～3 个阶段完成，种公猪射精的过程约需 5 min～10 min。采精操作要 持续到公猪阴茎缩回并自行退下假母猪台为止，中途不能终止操作，切忌粗暴推下或抽打。 4.3 采精时间和频率 4.3.1 采精时间 一般情况下早上进食前或进食后 1 小时采精。盛夏中午不采，严冬早晨不采。 4.3.2 采精频率 经训练调教后的种公猪，一般一周采精一次，12 月龄后每周采精可增加至 2 次，成年 2 DB 5206/T 01-2018 后每周采精 2～3 次。 5 精液的品质检查 5.1 采精量 采集精液后以量筒测量精液体积，成年种公猪一次射精量为 100mL～500mL。 5.2 颜色 正常精液颜色为乳白色或灰白色；其它颜色的精液为不正常精液，应废弃。 5.3 气味 正常精液略带腥味，如有异常气味不可用于输精。 5.4 PH 值 以 PH 计或 PH 试纸测量，正常范围 7.0～7.8。 5.5 活力 精子活力的评定采取显微镜下目力估测，一般按 0.1～1.0 的十级评分法评分。直线前 进运动的精子占 100%则评为 1 分，90%评分为 0.9 分，80%评分为 0.8 分，以此类推。用于 输精的精液精子活力要求不低于 0.7。检查活力时载玻片和盖玻片都应在 37℃恒温箱中预 热。压片检测法精液干燥较快，检查须迅速完成。 5.6 密度 指每毫升精液中所含的精子数，是确定稀释倍数的重要标准。可用血细胞计数板计数或 精子密度测定仪测定。用于输精的精液精子密度以不低于 1 亿个/mL 为宜。 5.7 畸形率 指异常精子的百分率。畸形精子种类很多，如：巨型精子、短小精子、双头或双尾精子， 顶体膨胀或脱落、精子头部残缺或尾部分离、尾部变曲。用于输精的精液精子畸形率要求不 超过 18%。畸形率的测定可用普通显微镜，但需伊红染色或姬姆萨染色，相差显微镜可直接 观察精子畸形率。 精液品质检查完成后，填写种公猪精液品质检查登记表见附录 B。 6 精液的稀释、分装、保存和运输 6.1 精液的稀释 6.1.1 稀释液的配制 配方 1：葡萄糖 5g，蒸馏水 100mL。 配方 2：葡萄糖 6g，柠檬酸钠 0.35g，碳酸氢钠 0.12g，乙二胺四乙酸二钠 0.37g，蒸 馏水 100mL。 上述各稀释液按配方先将葡萄糖、柠檬酸钠等溶于蒸馏水中，过滤后蒸气消毒 30min， 取出冷却至 30℃～35℃时，加入卵黄，然后以每 100 mL 加入青霉素、链霉毒各 5 万 IU，搅 拌均匀备用。稀释液保存在 4℃ 的冰箱中，不超过 24 小时。 6.1.2 精液的稀释 3 DB 5206/T 01-2018 精液采集后应尽快稀释，原精保存不超过 30 分钟。稀释液与精液要求等温稀释，两者 温差不超过 1℃，即稀释液应加热至 33℃～37℃，以精液温度为标准，来调节稀释液的温度， 绝不能反过来操作。精液的稀释倍数为 1:1～1:2，稀释时将稀释液沿集精杯壁缓慢加入到 精液中，然后轻轻摇动或用消毒玻璃棒搅拌，使之混合均匀。稀释倍数的确定：要求每个输 精剂量含有效精子数 30 亿以上，输精量为 80mL～100mL 确定稀释倍数。 6.2 精液的分装 稀释后的精液，用一次性输精瓶分装，分装量为一份输精的用量（80mL～100mL），盖紧 瓶盖，标明种公猪品种、耳号、生产日期、保存有效期等。 6.3 精液的保存 分装好的精液应用毛巾毛巾包严置于 17℃的恒温箱中保存，每隔 12 h 轻轻翻动 1 次， 防止精子沉淀而引起死亡。稀释后的精液保存时间一般为 3-5 d，应尽快使用。 6.4 精液的运输 精液运输时应置于保温效果较好的容器内，保持在 15℃～25℃，运输过程中避免强烈 震动。 7 输精 7.1 母猪发情鉴定 母猪从性成熟开始，每间隔 21 天左右发情一次，发情持续期为 3～4 天。发情时鸣叫、 站卧不安、食欲减退、爬跨、外阴红肿有分泌物流出。 7.2 适时输精 母猪适宜配种时期以发情期的后期为宜，即发情开始后 36～48 小时内，此时母猪阴户 红肿刚减退（打皱），粘液由稀变浓，燥动稍减，按压其臀部站立不动（即静立反应） ，这时 输精最适宜。 7.3 精液检查 从 17℃的恒温箱中取出精液，轻轻摇匀，用微量移液管取 1 滴放于预热的载玻片，置 于 37℃的恒温箱上片刻，用显微镜检查活力，精子活力在 0.7 以上，方可使用。 7.4 输精前的准备 输精人员洗净手，把输精器材用少量稀释液冲洗一遍，用 0.1%高锰酸钾溶液冲洗、擦 干母猪外阴部。 7.5 输精方法 输精所用器械最好用一次性的，输精方法有注射法和自然法两种。输精前应使母猪保持 自由站立状态。输精时，用注射器吸取精液，再将它连接胶管(自然法直接将精液容器连接 胶管)，然后把输精胶管从母猪阴户徐徐插进去，沿母猪阴道上壁缓缓前进，当插不动时， 可稍退再进，直到输精管插入 20cm～30cm 为止，动作要轻，输精员用手或左(右)脚踏在母 猪腰背部，左手拉住尾巴，右手持注射