(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210362217.1 (22)申请日 2022.04.07 (71)申请人 山东第一医科 大学 （山东省医学 科 学院） 地址 271016 山 东省济南市槐荫区青岛路 6699号 (72)发明人 周鹏　方晨　左柏伊　严江伟　 郭艺琳　王瑞祺　李敏　孟德萍　 孙文平　刘敏　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 张梦泽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01)C12Q 1/6851(2018.01) G06N 5/00(2006.01) (54)发明名称 piRNA作为诊断标志物在法医鉴定急性心梗 和/或推断急性心梗持续发病时间中的应用 (57)摘要 本发明提供了piRNA作为诊断标志物在法医 鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间 中的应用， 属于法医学鉴定技术领域； piRNA包括 rno＿piR＿003035和rno＿piR＿005736。 本发明 的piRNA适用于急性心梗的鉴别， 两种piRNA在心 梗初期表达量就发生显著变化， 因此能够应用本 发明的piRNA实现对心梗急性或超急性期 进行鉴 定。 此外， rno＿piR＿003035和rno＿piR＿ 005736还可以用于急性心梗持续时间的推断， 对 心梗4h内的个体进行心梗时间推断， 误差在0.5h 内， 弥补了以往急性心梗时间难以推断的难题。 权利要求书2页 说明书12页 序列表1页 附图1页 CN 114736956 A 2022.07.12 CN 114736956 A 1.piRNA作为诊断标志物在法医鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间中的 应用； 所述piRNA包括rno＿piR＿003035和rno＿piR＿005 736； 所述rno＿piR＿003035的核 苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述rn o＿piR＿0 05736的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 2.piRNA作为诊断标志物在制备鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间的试 剂或试剂盒中的应用； 所述piRNA包括rno＿piR＿003035和rno＿piR＿005736； 所述rno＿ piR＿003035 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述rno＿piR＿005736 的核苷酸序列如 SEQ ID NO.2所示。 3.根据权利要求1或2所述的应用， 其特征在于， 所述急性心梗包括发病5min～4h内的 急性心梗。 4.根据权利 要求1或2所述的应用， 其特征在于， 所述piRNA在急性心梗大鼠心肌组织中 的表达水平上调。 5.一种用于鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间的引物组， 所述引物组包 括第一引物和第二引物； 所述第一引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述第二引物的核苷酸序列如SEQ   ID NO.4所示。 6.一种用于鉴定急性心梗和/或推断急性心梗持续发病时间的试剂 盒， 包括权利要求5 所述的引物组和miRcute增强型miRNA荧 光定量检测用试剂。 7.一种用于法医鉴定急性心梗的方法， 包括以下步骤： 1)分别提取待检心肌组织和正常心肌组织的piRNA， 分别反转录得到待检心肌组织的 cDNA和正常心肌组织的piRNA； 2)分别以所述待检心肌组织的cDNA和正常心肌组织的piRNA为模板， 利用权利要求5所 述的引物组分别进行荧光定量PCR扩增， 分别计算待检心肌组织和正常心肌组织的rno ‑ piR‑005736和rno‑piR‑003035的Ct值； 若待检心肌组织相对于正常心肌组织的rno_piR_005736表达水平上升2.38倍及以上、 且piRNA‑003035的表达水平上升2.14倍及以上， 则判定发生急性心梗； 否则， 没有发生急性 心梗。 8.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中所述荧光定量PCR扩增的扩增体 系以20 μl计， 包括以下组分： 10 μL2 ×miRcute Plus miRNA PreMix、 0.4 μL上游引物、 0.4 μL 下游引物、 2 μL  cDNA和7.2 μL  ddH2O； 所述荧光定量PCR扩增的程序为： 95℃、 15min； 94℃、 20sec， 64℃、 30sec， 72℃、 34sec， 5 个循环； 94℃、 20sec， 6 0℃、 34sec， 40个 循环。 9.一种用于推断急性心梗持续发病时间的模型的构建方法， 包括以下步骤： 测定不同急性心梗持续发病时间的心肌组织的rno ‑piR‑005736和rno ‑piR‑003035的 表达量； 以不同急性心梗持续发病时间的rno ‑piR‑005736和rno ‑piR‑003035的表达量为自变 量、 以急性心梗持续发病时间为因变量， 使用随机森林模型建立得到急性心梗持续时间推 断模型。 10.一种法医推断急性心梗持续发病时间的方法， 包括以下步骤： 测定待检心肌组织的rno ‑piR‑005736和rno ‑piR‑003035的表达量， 导入权利要求9所权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114736956 A 2述构建方法构建得到的急性心梗持续时间推断模型， 输出急性心梗持续发病时间。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114736956 A 3