(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210549881.7 (22)申请日 2022.05.20 (71)申请人 郑州科蒂亚 生物技术有限公司 地址 450000 河南省郑州市高新区莲 花街 352号高新国际企业港23号楼 (72)发明人 刘一丁　李先坤　王艺杰　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 温可睿 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6841(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 HER2/CEP17基因检测探 针及其应用 (57)摘要 本发明涉及基因检测技术领域， 尤其涉及 HER2/CEP17基因检测探针及其应用。 本发明通过 对多个核酸片段进行筛选， 获得最优 标记效果的 探针。 本发明提供的探针基于 FISH技术对样品进 行检测， 将其作为乳腺癌诊断的试剂， 能够获得 更准确、 更灵敏的检测效果。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图2页 CN 114703286 A 2022.07.05 CN 114703286 A 1.HER2基因的检测探针， 其 为17号染色体上第396 55584位～398173 09位核酸。 2.根据权利要求1所述的检测探针， 其特 征在于， 所述探针上 标记orange  552 dUTP。 3.CEP17位点的检测探针， 其特 征在于， 其核酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 4.根据权利要求3所述的检测探针， 其特 征在于， 所述探针上 标记CF48 8A dUTP。 5.权利要求1～4所述检测探针在制备乳腺癌诊断试剂中的应用。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述诊断包括根据患 者HER2是否过表达选 择治疗药物。 7.一种乳腺癌的诊断试剂， 其特 征在于， 包括权利要求1～4所述的检测探针。 8.根据权利要求7 所述的诊断试剂， 其特 征在于， 还 包括Human  cot‑1和FISH试剂。 9.根据权利要求8所述的诊断试剂， 其特征在于， HER2基因检测探针、 CEP17基因检测探 针和Human  cot‑1的质量比为0.0 5:1:25。 10.根据权利 要求8所述的诊断试剂， 其特征在于， 所述FISH试剂包括3M醋酸钠、 无水乙 醇、 70vol％乙醇和探针杂交液； 所述探针杂交液包括硫酸葡聚糖、 去离 子甲酰胺和2 ×SSC。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114703286 A 2HER2/CEP17基因检测探针及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及基因检测技 术领域， 尤其涉及H ER2/CEP17基因检测探针及其应用。 背景技术 [0002]乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤， 是由乳房组织发展成的癌症。 研究 表明， 一种受体型的酪氨 酸激酶‑人类表皮生长因子受体2(HER2)在20％～30％的原发性乳 腺浸润性导管癌中有基因的扩增和蛋白的过度表达。 HER2阳性的乳腺癌浸润性强， 无病生 存期短， 预后差。 《2005  St Gallen国 际治疗指南》 指出， 在乳腺癌风险级别评估因子当中， 虽然淋巴结状态仍然是最重要的因素， 但HER2状态直接影响风险的级别。 当淋巴结阴性或 只有1～3个淋巴结有转移时， 如HER2过表达或基因扩增则风险级别分别由低上升为中， 中 上升为高。 另外， 把HER2状态作为乳腺癌药物(环磷酞胺、 阿霉素、 5 ‑氟尿嚓咙和曲妥珠单 抗)治疗的主要参考指标。 曲妥珠单抗(赫赛汀)是一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体， 选择性地作用于HER2的细胞外部位， 适用于治疗HER2过度表达的乳腺癌。 由于只有HER2过 度表达和基因扩增的乳腺癌患者用曲妥珠单抗治疗才有效， 因此正确检测和评定乳腺癌的 HER2状态至关重要。 [0003]HER2基因位于17号染色体上， 大约有47％的乳腺癌存在17号染色体非整体性 (aneusomy)， 即17号染色体不是正常的二体(2条17号染色体)， 而是单体(1条17号染色体) 或多体(3条或以上17号染色体)。 在检测中应将17号染色体的非整体性和单纯的HER2基因 扩增， 尤其是低水平的扩增区分开。 当HER2基因与17号染色体数 目比值大于2时， 即为HER2 基因扩增。 因此， 在检测HER2的同时检测17号染色体着丝粒作为对照， 就排除了单色探针 (探针中仅有H ER2基因)可能造成的假阴性(17号染色体单体)或假阳性(17号染色体多体)。 [0004]当HER2/CEP17比值＞2.0 时， 为HER2阳性； HER2/CEP17比值<2.0， 但平均HER2拷贝 数/细胞≥6.0时也为HER2阳性。 扩增细胞应均质、 连续， 且占浸润癌的10％以上。 需要注意 的是对于HER2/CEP17比值≥2.0， 但平均HER2拷贝数/细胞<4.0的病例是否应该视为ISH阳 性目前尚存一定争议。 [0005]目前一般采用免疫组织化学(IHC)检侧HER2受体蛋白过度表达， 应用荧光原位杂 交(fluorescence  in situhybridization,FISH)和显色原位杂交(chromogenic  in  situhybridization,CISH)法检测HER2 基因扩增的水平。 其中， FISH是一种分子细胞遗传学 技术， 通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交。 在荧光显微镜下， 于细胞和 (或)组织原位观察并分析细胞核内杂交于DNA靶序列的多种彩色探针信号， 以获得细胞内 多条染色体(或染色体片段)或多种基因状态的信息。 临床使用美国FDA已经批准的探针对 HER2进行检测， 但其标记效果 仍有待进一步提高。 发明内容 [0006]有鉴于此， 本发明要解决的技术问题在于提供标记效果更好的尤其涉及HER2/ CEP17基因检测探针及其应用。说　明　书 1/6 页 3 CN 114703286 A 3