(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210572205.1 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 浙江中医药大学 地址 310000 浙江省杭州市滨 文路548号 (72)发明人 李范珠　张钶　朴寄纲　郑红月　 谢晓伟　刘爱迪　 (74)专利代理 机构 浙江英普律师事务所 3 3238 专利代理师 王炎军 (51)Int.Cl. A61K 41/00(2020.01) A61K 9/14(2006.01) A61K 31/195(2006.01) A61K 33/34(2006.01) A61K 33/36(2006.01) A61P 1/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种协同治疗结肠癌的自组装纳米片及其 制备方法 (57)摘要 本发明提供了一种协同治疗结肠癌 的自组 装纳米片及其制备方法， 该自组装纳米片依靠非 共价相互作用力将Cu2+、 As5+和AOAA相结合， 形成 H2S响应的自组装纳米片， 通过改变结肠癌微环 境并引发协同疗法， 达到最大程度治疗结肠癌的 目的； 解决结肠癌高浓度H2S微环境所引起的疗 效受限问题； 解决结肠癌单一疗法临床效果不 佳、 毒副作用明显等问题； 解决砒霜有效成分三 氧化二砷正常组织分布高， 导致毒副作用的问 题。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 115120719 A 2022.09.30 CN 115120719 A 1.一种协同治疗结肠癌的自组装纳米片， 其特征在于： 所述的协同治疗结肠癌的自组 装纳米片通过非共价相互作用力将Cu2+、 As5+和氨基氧乙酸AOAA相结合制备的Cu ‑As‑AOAA 自组装纳米片。 2.根据权利要求1所述的协同治疗结肠癌的自组装纳米片的制备方法， 其特征在于， 包 括以下步骤： (1)将氯化铜(CuCl2·2H2O)、 砷酸氢二钠(Na2HAsO4·7H2O)和氨基氧乙酸(AOAA)分别溶 解于超纯 水中， 得到 3份溶液； (2)在冰水浴搅拌下， 依次加入CuCl2、 Na2HAsO4和AOAA溶液， 反应结束后得到混合液； (3)将混合液置 于高压水 热釜中， 反应一定时间后固液分离， 得到 Cu‑As‑AOAA纳米片。 3.根据权利要求2所述的协同治疗结肠癌的自组装纳米片的制备方法， 其特征在于： 所 述CuCl2·2H2O、 Na2HAsO4·7H2O和AOAA的质量比为0～ 20： 10～3 0:1。 4.根据权利要求2所述的协同治疗结肠癌的自组装纳米片的制备方法， 其特征在于： 所 述CuCl2溶液质量分数为0.4～0.8％、 Na2HAsO4溶液质量分数为0.8～2％和AOAA溶液质量分 数为0.01～0.1％。 5.根据权利要求2所述的协同治疗结肠癌的自组装纳米片的制备方法， 其特征在于： 所 述步骤(2)中， 所述冰水浴温度为0～8℃； 所述反应时间为10～5 0min。 6.根据权利要求2所述的协同治疗结肠癌的自组装纳米片的制备方法， 其特征在于： 所 述步骤(3)中， 所述反应时间为15～45mi n。 7.根据权利要求2所述的协同治疗结肠癌的自组装纳米片的制备方法， 其特征在于： 所 述步骤(3)中， 所述反应温度为16 0～200℃。 8.根据权利要求2所述的协同治疗结肠癌的自组装纳米片的制备方法， 其特征在于： 所 述步骤(3)中， 所述固液分离方式可采用离心或过 滤方式。 9.根据权利要求2所述的协同治疗结肠癌的自组装纳米片的制备 方法， 其特 征在于： 步骤(1)中， 所述CuCl2·2H2O、 Na2HAsO4·7H2O和AOAA的质量比为为0～10： 10～20:1； 所 述CuCl2溶液质量分数为0.5～0.7％、 Na2HAsO4溶液质量分数为1～1.8％和AOAA溶液质量分 数为0.03～0.08％； 步骤(2)中， 所述冰水浴温度为2 ～6℃； 所述反应时间为20～40mi n； 步骤(3)中， 所述反应时间为25～3 5min； 所述反应温度为170～190℃。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115120719 A 2一种协同治疗结肠癌的 自组装纳米片及其制备方 法 技术领域 [0001]本发明属于医药领域纳米片的制备领域， 具体涉及一种能够调节结肠癌微环境中 硫化氢浓度并引发协同治疗的自组装纳米片及其制备技 术。 背景技术 [0002]高浓度硫化氢(H2S)是结肠癌微环境主要特征之一， 是治疗多种疾病的独特病理 生物学障碍， 在促进肿瘤增殖、 营造免疫抑制微环境、 保护肿瘤细胞免受氧化损伤等方面 发 挥着至关重要的作用。 因此， 调节结肠癌高浓度H2S微环境， 破坏保护性屏障， 能够增加肿瘤 对药物的敏感性。 [0003]砒霜又名白砒， 有效成分为三氧化二砷(AT O)， 其注射液已被批准为急性早幼 粒细 胞白血病的一线化疗(CT)药物， 抗肿瘤机制主要包括抑制细胞增殖、 抑制侵袭转移和促进 细胞凋亡。 然而ATO的非特异性使其容易对正常组织造成毒副作用,严重影响患者生存质 量。 此外,ATO往往受限于肿瘤耐药性,导致治疗效果不佳。 有研究表明， ATO的毒性和疗效强 弱主要与其所含的砷元素价态有关， 三价砷(As3+)的毒性和疗效都显著高于五价砷(As5+)。 原位激活药物体系， 能够降低药物分布特异性差引起的毒副作用， H2S作为一种强还原性气 体， 能够将 As5+还原成As3+， 实现结肠癌部 位As5+到As3+的转变， 从而降低ATO对正常组织的毒 副作用； 同时还原过程还伴随着H2S含量的下降， 具有一定的H2S清除效果。 [0004]铜离子(Cu2+)具有强大的阴离子结合能力， 其能和H2S反应， 消耗H2S的同时生成稳 定产物硫化铜。 硫化铜作为一种光热材料， 不仅具有高效的光热转化效率， 还能将过氧化氢 (H2O2)转化为高度 氧化的羟基自由基( ·OH)， 产生ROS诱导细胞凋亡， 发挥化学动力学疗法 (CDT)的作用。 [0005]消耗H2S作为调节结肠癌微环境的策略之一， 仅能够在一定时间内降低H2S浓度， 解 决这一问题关键在于产生H2S的源头。 氨基氧乙酸(AOAA)是一种应用广泛的H2S生成抑制剂， 能够通过抑制胱硫醚 ‑β‑合成酶(CBS)的活性从而抑制H2S的生成。 但AOAA的亲水特性使其 疗效受限； 目前常修饰甲酯或乙酯等基团改善药物的物理化学性质， 使其能够更好地被细 胞摄取， 但是这种方法仍存在非靶部位 起效、 毒副作用等问题亟 待解决。 [0006]因此， 我们提出 “两耗一抑 ”调节结肠癌微环境策略， 利用Cu2+和As5+双重消耗H2S， AOAA抑制H2S的生成， 降低结肠癌微环境中H2S的浓度， 增加结肠癌对药物的敏感性。 随后， As5+被H2S原位还原成As3+， 降低对正常组织的毒副 作用， 但是单独使用ATO存在耐药性问题, 导致治疗效果不佳。 Cu2+和H2S反应产物硫化铜能产生ROS诱导细胞凋亡， 然而， 这一能力受 到肿瘤微环境中H2O2含量的限制； 硫化铜的高效光热转换能力， 通过高温杀死肿瘤， 不需要 借助ROS就可达到杀伤肿瘤的目的； 三种不同作用机制的疗法相互协同， 最大程度消融肿 瘤。 有研究表明， 硫化铜具有良好的催化H2O2产生ROS能力， 为在更大程度 上增加疗效， 寻找 药物联用进一步增强ROS的生成能力成为有效的途径。 As3+能够发挥化 学疗法(CT)通过产生 活性氧(ROS)促进肿瘤细胞凋亡， 两种疗法的联用进一步增加ROS生 成， 能更好地杀伤肿瘤。 光热治疗(PTT)是利用具有较高光热转换效率的材料， 将其注 射入人体内部后， 在外部光源说　明　书 1/5 页 3 CN 115120719 A 3