(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210343044.9 (22)申请日 2022.04.02 (71)申请人 广东省农业科 学院果树研究所 地址 510640 广东省广州市天河区大丰二 街80号 (72)发明人 邵雪花　肖维强　匡石滋　赖多　 刘传和　贺涵　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 齐键 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种橄榄IS SR-PCR分子标记组合及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种橄榄ISSR ‑PCR分子标记 组合及其应用， 其主要基于SEQIDNO： 1～10组成 的ISSR引物组实现鉴别橄榄遗传多样性分析的 功能。 且本发 明中的引物组相对于传统方法有效 的减少了引物数量， 并可以在更大的样本量的情 况下实现高精 准度的测定工作， 可识别的多态性 高达99.2 6％。 而且基于 该方法， 其条带分辨率更 高， 扩增片段更清晰， 反应更加稳定， 多态 性识别 度更高， 可在短时间内完成大批量实验材料鉴 定， 能准确分辨橄榄种质资源间的亲缘关系， 对 橄榄种质资源的鉴定有重大意 义。 权利要求书1页 说明书11页 序列表2页 附图9页 CN 114807413 A 2022.07.29 CN 114807413 A 1.一组用于鉴别橄榄遗传多样性分析的ISSR引物组， 其特征在于， 所述引物组由SEQ   ID NO： 1～10组成。 2.一种用于鉴别橄榄遗传多样性分析的检测试剂， 其特征在于， 所述检测试剂中含有 权利要求1所述的IS SR引物组。 3.权利要求1所述的IS SR引物组在制备橄榄遗传多样性检测产品中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述产品包括检测试剂、 检测试剂 盒、 检测 芯片。 5.权利要求1所述的IS SR引物组在橄榄种质选 育中的应用。 6.一种鉴别橄榄品种遗传多样性的方法， 包括如下步骤： (1)提取橄榄样品DNA， 基于SEQ  ID NO： 1～10中至少一条引物分别独立进行扩增， 得到 扩增产物； (2)电泳分离扩增产物， 并进行凝胶成像， 获得 条带信息； (3)根据条 带信息进行聚类分析， 并建立DNA指纹图谱， 从而鉴别出橄榄品种。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特 征在于， 步骤(1)中所述扩增的反应 体系为： 8.根据权利 要求7所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述扩增的反应程序为： 94～95 ℃预变性2～5min； 94～95℃变性25～30s， 50℃退火42～45s， 40～45个循环； 72℃延伸9～ 10min。 9.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述引物为SEQ  ID NO:1、 3、 5、 7～8和10的 组合。 10.根据权利要求6所述的方法， 其特 征在于， 所述引物为SEQ  ID NO： 1～10的组合。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807413 A 2一种橄榄I SSR‑PCR分子标记组合及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学领域， 具体涉及一种橄榄ISSR ‑PCR分子标记组合及其应 用。 背景技术 [0002]橄榄(Canarium  album)是橄榄科橄榄属乔木， 又名黄榄、 青果、 橄榄子等。 原产于 中国南方， 主要分布在我国福建、 广东、 四川、 广西、 重庆和浙江等南部省份和地区， 尤以广 东和福建栽培最多。 橄榄 是一种传统的药食同源的水果， 其味甘酸， 性平， 有清热解毒、 利咽 化痰、 除烦醒酒的作用。 橄榄果 实富含丰富的多酚类物质、 黄酮 类化合物， 可加工制成果 酒、 果汁、 茶叶等， 还能用于抗病毒、 抗氧化、 保护肝脏、 提高免疫和调节血脂血糖等方面。 [0003]相关技术中， 橄榄新品种选育工作发展迅速， 由于不同地区的橄榄品种存在相互 引种、 杂交等情况， 导致了各个地区橄榄品种遗传背 景复杂。 现有的橄榄品种鉴定工作大多 依靠形态特征鉴别， 从而使得橄榄遗传背景不明确， 而且由于缺 乏科学系统的检测方法和 权威的分类系统， 致使同名异物或同物异名的现象时常发生， 为橄榄品种的鉴别工作带来 了极大的挑战。 [0004]ISSR(Inter ‑simple Sequence Repeat)是物种遗传多样性研究中的常见方法， 具 有不受环境影响， 结合位点丰富和灵敏度准确性高等特点， 在品种鉴定方面， DNA分子标记 技术与传统技 术相比具有更加突出的优点。 [0005]相关技术中， 虽然也有采用ISSR分子标记技术鉴别橄榄的报道， 但其鉴定准确度 普遍无法实现大样本量下的高精度 的要求， 有研究人员对86份橄榄进行了遗传多样性分 析， 使用12条ISSR引物共扩增242条带， 多态 性百分率仅为95.45％， 且对引物的需求量大并 需要借助其它技术手段进行联合分析， 鉴定工作较复杂； 有研究对云南的59份油橄榄进行 了ISSR鉴定分析， 1 1对引物共 扩增出了10 6条条带， 多态性百分率仅为89.6 0％。 [0006]因此， 开发一种才有更少引 物、 且在更大规模样本量筛查中能够显示出更高多态 性百分率的橄榄品种鉴定方法对于提高橄榄品种鉴定的工作效率以及鉴定准确 性都具有 极为重要的意 义。 发明内容 [0007]本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。 为此， 本发明提出一 种橄榄ISSR ‑PCR分子标记组合及其应用。 本申请发现了一组橄榄ISSR ‑PCR分子标记的引物 组， 可准确鉴定大样本量的橄榄样品， 并准确的进 行种质分类， 从而实现橄榄品种的准确鉴 定工作， 降低橄榄选 育难度和不确定性。 [0008]本发明的第一个方面， 提供一组用于鉴别橄榄遗传多样性分析的ISSR引物组， 所 述引物组由SEQ  ID NO： 1～10组成。 [0009]其中， 所述SEQ  ID NO： 1～10的具体核苷酸序列如下 所示。 [0010]UBC808： 5 ’ ‑AGAGAGAGAGAGAGAGC ‑3’(SEQ ID NO:1)说　明　书 1/11 页 3 CN 114807413 A 3