(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210365516.0 (22)申请日 2022.04.07 (71)申请人 上海市第十人民医院 地址 200072 上海市 静安区延长中路3 01号 (72)发明人 刘淑鹏　程忠平　刘力　王春燕　 朱基慧　刘碧婷　 (74)专利代理 机构 上海领誉知识产权代理有限 公司 31383 专利代理师 王琰 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G16B 20/30(2019.01) (54)发明名称 一种用于评估卵巢原始卵泡储备量的标志 物组合及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于评估卵巢原始卵泡 储备量的标志物组合， 其选自Lhx8、 Sohlh1、 Nobox、 Stk31、 Tbpl2、 Padi6和Vrtn基因 中的至少 一个， 并公开了上述标志物组合在制备用于评估 卵巢原始卵泡储 备量的产品中的应用， 上述产品 包括用于扩增标志物组合中的基因序列的引物 组合物。 本发 明还公开一种评估卵巢原始卵泡储 备量的方法， 其采用qRT ‑PCR的方法对标记物组 合进行扩增， 检测mRNA 的相对表达量； 通过对应 的mRNA表达量评估原始卵泡数的拟合方程， 进行 卵巢原始卵泡储 备量的评估。 本发 明首次确定适 用于预测卵巢卵泡池储备的生物标记物， 其建立 的评估方程可快速实现卵巢组织中卵巢原始卵 泡储备量的确切评估， 其为临床及动物实验中评 估卵巢储备功能提供新手段。 权利要求书2页 说明书12页 序列表11页 附图3页 CN 114703275 A 2022.07.05 CN 114703275 A 1.一种用于评估卵巢原始卵泡储备量的标志物组合， 其特征在于， 所述标志物组合选 自Lhx8、 Sohlh1、 N obox、 Stk31、 Tbpl2、 Padi6和V rtn基因中的至少一个。 2.根据权利要求1所述的一种用于评估卵巢原始卵泡储备量的标志物组合， 其特征在 于， 所述基因的序列如下所示： Lhx8基因的序列如SEQ  ID NO.1所示； Sohlh1基因的序列如 SEQ ID NO.2所示； Nobox基因的序列如SEQ  ID NO.3所示； Stk31基因的序列如SEQ  ID NO.4 所示； Tbpl2 基因的序列如SEQ  ID NO.5所示； Padi6基因的序列如SEQ  ID NO.6所示； Vrtn基 因的序列如SEQ  ID NO.7所示。 3.如权利要求1或2所述的用于评估卵巢原始卵泡储备量的标志物组合在制备用于评 估卵巢原 始卵泡储备量的产品中的应用。 4.一种用于评估卵 巢原始卵 泡储备量的产品， 其特征在于， 包括用于扩增如权利要求1 或2所述的标志 物组合中的基因序列的引物组合物。 5.根据权利要求4所述的一种评估卵 巢原始卵 泡储备量的产品， 其特征在于， 所述引物 组合物选自下述引物对中的至少一种： 用于扩增Lhx8基因的引物对： 如SEQ  ID NO.8和SEQ  ID NO.9所示； 用于扩增Sohlh1基因的引物对： 如SEQ  ID NO.10和SEQ  ID NO.11所示； 用于扩增N obox基因的引物对： 如SEQ  ID NO.12和SEQ  ID NO.13所示； 用于扩增Stk31基因的引物对： 如SEQ  ID NO.14和SEQ  ID NO.15所示； 用于扩增Tbpl2基因的引物对： 如SEQ  ID NO.16和SEQ  ID NO.17所示； 用于扩增Padi6基因的引物对： 如SEQ  ID NO.18和SEQ  ID NO.19所示； 用于扩增V rtn基因的引物对： 如SEQ  ID NO.20和SEQ  ID NO.21所示。 6.根据权利要求4或5所述的一种评估卵巢原始卵泡储备量的产品， 其特征在于， 所述 产品为试剂盒， 所述试剂盒还包括RNA提取试剂、 RNA逆转录试剂、 P CR扩增试剂、 对照试剂中 的至少一种。 7.一种如权利要求 4或5所述的产品的使用方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： S1、 采用RNA提取 试剂从样本中提取总RNA； S2、 采用RNA逆转录试剂将步骤S1提取的RNA逆转录为cDNA； S3、 采用PCR扩增试剂和引物组合物对步骤S2 获得的逆转录产物cDNA进行实时定量PCR 扩增。 8.根据权利要求7所述的使用方法， 其特征在于， 所述步骤S1中采用的样本为小鼠卵巢 组织、 人活检卵巢组织 或卵巢组织片、 或其他动物卵巢组织中的一种； 和/或， 所述步骤S 3中 PCR扩增程序为： 在95.0℃下30秒进行cDNA变性， 然后在95℃和60℃下进行40个循环， 时间 为15秒。 9.一种评估卵巢原始卵泡储备量的方法， 其特征在于， 包括步骤： 采用qRT ‑PCR的方法 对标记物组合中的基因序列进行扩增， 检测mRNA的相对表达量； 采用所述mRNA的相对表达 量通过对应的拟合方程计算原始卵泡数， 以进行卵巢原始卵泡储备量的评估； 其中， 所述标 志物组合选自Lhx8、 Sohlh1、 N obox、 Stk31、 Tbpl2、 Padi6和V rtn基因中的至少一个。 10.根据权利要求9所述的一种评估卵巢原始卵泡储备量的方法， 其特征在于， 所述拟 合方程选自以下中的至少一种： Lhx8基因： y＝1745.5934 47460678‑0.8327115616008314/x；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114703275 A 2Sohlh1基因： y＝exp(7.6472095 36675994‑0.0001055515164060347/x)； Nobox基因： y＝exp(7.710 54‑0.00174/x)； Stk31基因： y＝ 4909.637655898115+480.7475 02950626*ln(x)； Tbpl2基因： y＝5419.5 52518698913+518.0 607869674149*l n(x)； Padi6基因： y＝2 925.12512341510 6+430.7662651255001*ln(x)； Vrtn基因： y＝ 4594.831+457.468*l n(x)； 其中， 上述拟合方程中， y代表原始卵泡数； x代表mRNA的相对表达量， 以Gapdh内参的2 ^‑ΔCt。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114703275 A 3