(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210366030.9 (22)申请日 2022.04.08 (71)申请人 中国水产科 学研究院淡水渔业研究 中心 地址 214081 江苏省无锡市滨湖区山水东 路9号 (72)发明人 唐永凯　李建林　李红霞　王美垚　 于凡　苏胜彦　冯文荣　 (74)专利代理 机构 无锡华源专利商标事务所 (普通合伙) 32228 专利代理师 冯智文 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于建鲤2号鉴定的分子标记、 鉴定方 法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于 建鲤2号鉴定的分子 标记、 鉴定方法及应用。 本发明所述分子标记组 合包括13个SNP分子 标记， 依次为第1 ‑13SNP分子 标记， 待测建鲤含有13个SNP分子标记中7个及以 上SNP分子标记即为 建鲤2号。 本发明通过鉴定建 鲤2号特异性分子标记， 能准确鉴定出建鲤2号， 具有简单易行、 操作方便、 鉴定成功率高等优点， 建鲤2号特异性分子标记的开发， 对建鲤2号种源 可控、 养殖推广、 育种方案的制定和育种计划的 有效管理具有重要的作用。 权利要求书2页 说明书7页 序列表10页 附图1页 CN 114657263 A 2022.06.24 CN 114657263 A 1.一种建鲤2号鉴定的分子标记组合， 其特征在于， 所述分子标记组合包括13个SNP分 子标记， 依次为第1 ‑13SNP分子标记， 待测建鲤含有13个SNP分子标记中7个以上SNP分子标 记即为建鲤2号。 2.根据权利要求1所述的分子标记组合， 其特 征在于， 第1SNP分子标记为碱基CC， 所述SNP标记位于核酸的第 30位， 所述第1SNP分子标记的核 苷酸序列如SEQ  ID NO： 1所示； 第2SNP分子标记为碱基CC， 所述SNP标记位于核酸的第386位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 2所示核苷酸序列； 第3SNP分子标记为碱基CC， 所述SNP标记位于核酸的第450位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 3所示核苷酸序列； 第4SNP分子标记为碱基GG， 所述SNP标记位于核酸的第159位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 4所示核苷酸序列； 第5SNP分子标记为碱基GG， 所述SNP标记位于核酸的第30位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 5所示核苷酸序列； 第6SNP分子标记为碱基CC， 所述SNP标记位于核酸的第511位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 6所示核苷酸序列； 第7SNP分子标记为碱基AA， 所述SNP标记位于核酸的第43位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 7所示核苷酸序列； 第8SNP分子标记为碱基GG， 所述SNP标记位于核酸的第361位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 8所示核苷酸序列； 第9SNP分子标记为碱基AA， 所述SNP标记位于核酸的第212位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 9所示核苷酸序列； 第10SNP分子标记为碱基AA， 所述SNP标记位于核酸 的第19位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 10所示核苷酸序列； 第11SNP分子标记为碱基AA， 所述SNP标记位于核酸的第126位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 11所示核苷酸序列； 第12SNP分子标记为碱基GG， 所述SNP标记位于核酸 的第99位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 12所示核苷酸序列； 第13SNP分子标记为碱基CC， 所述SNP标记位于核酸的第487位， 所述核酸具有如SEQ  ID  NO： 13所示核苷酸序列。 3.根据权利要求1所述的分子标记组合， 其特征在于， 所述13个SNP分子标记的引物序 列依次为： 第1 ‑13SNP分子标记的正向引物的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO： 14～26所示； 第 1‑13SNP分子标记的反向引物的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO： 27～39所示。 4.一种利用权利要求1 ‑3任一项所述的分子标记 组合进行建鲤2号鉴定的方法， 其特征 在于， 所述方法包括如下步骤： (1)筛选、 设计引物； (2)提取待测建鲤样本的基因 组DNA； (3)PCR扩增： 运用PCR仪扩增提取的待测建鲤样本的基因 组DNA； (4)酶切、 电泳检测： 对PCR扩增产物进行酶切， 并用电泳分离检测；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114657263 A 2(5)根据电泳条带， 分析基因型， 获得每个待测建鲤样本的多个SNP分子标记位点的基 因型， 待测建鲤样本含有7个以上权利要求1所述13个SNP分子标记即为建鲤2号。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 步骤( 2)中， 取待测建鲤样本尾部鳍条少 量， 加入到450ul  1×STE的1.5ml离心管中， 同时加入10ul20mg/ml蛋白酶K和12.5ul  20％ 十二烷基硫酸钠， 混匀， 置于55℃水浴消化过夜， 然后采取酚氯仿法提取DNA， 加200ul去离 子水溶解后， 4℃保存备用。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)中， 所述PCR扩增的反应体系为： PCR反应总体积为15 μL， 其中30ng/ μL  DNA模板2 μL， 2 ×Taq PCR Mix 5 μL， 10 μmol/L正向和 反向引物各0.5 μL， 去离 子水7 μL。 7.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)中， 所述PCR扩增的反应程序： 95℃ 预变性3min； 94℃变性40s， 56～60℃退火40s， 72℃延伸1min， 循环30次； 72℃延伸5min； 4℃ 保存。 8.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 步骤(5)中， 所述多个SNP分子标记位点包 含于权利要求1所述13个SNP分子标记中。 9.一种权利要求1 ‑3任一项所述分子标记 组合的应用， 其特征在于， 所述分子标记 组合 用于鉴定建鲤2号。 10.一种权利要求 4‑8任一项所述方法在鉴定建鲤2号中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114657263 A 3