(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210382857.9 (22)申请日 2022.04.13 (71)申请人 深圳荻硕贝肯 精准医学有限公司 地址 518000 广东省深圳市大鹏新区葵涌 街道生命科 学产业园A17栋2 楼 (72)发明人 郑仲征　杜可明　徐祥　王思谕　 袁志阳　 (74)专利代理 机构 深圳华企汇 专利代理有限公 司 44735 专利代理师 谢伟 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测HLA-A02基因的引物探针组、 试剂盒及检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测HLA ‑A02基因的 引物探针组、 试剂盒及检测方法； 其中， 引物探针 组包括核苷酸如SEQ  ID NO.1至SEQ  ID NO.6所 示的HLA‑A02特异性引物和HLA ‑A02特异性探针； HLA‑A02基因的检测方法是采用试剂盒检测HLA ‑ A02， 基于TaqMan ®探针PCR技术来实现的， 具有 很高的特异性； 同时， 该方法通过合理的引物和 探针搭配， 有效避免引物与引物之间、 引物与探 针之间， 以及探针与探针之间的相互作用， 提高 了HLA‑A02检测的特异性， 有效避免了假阳性。 权利要求书2页 说明书6页 附图3页 CN 114457165 A 2022.05.10 CN 114457165 A 1.一种用于检测HLA ‑A02基因的引物探针组， 其特征在于， 包括核苷酸如SEQ  ID NO.1 至 SEQ ID NO.6所示的HLA ‑A02特异性引物和HLA ‑A02特异性探针； 其中， 所述核苷酸如SEQ   ID NO.1至 SEQ ID NO.6所示的引物探针组如下： 上游引物SEQ  ID NO.1:5'‑TCCTCGTCCCCAGGCACT‑3'； 下游引物SEQ  ID NO.2: 5'‑GAACTGCGTGTCGTC CACG‑3'； 上游引物SEQ  ID NO.3: 5'‑CGGGAACCTCCTGGACTACC‑3'； 下游引物SEQ  ID NO.4: 5'‑CATGGCTGACGAGATCTGAGTG ‑3'； 探针SEQ ID NO.5: FAM‑CCGCTTCATCGCAGTG ‑MGB； 探针SEQ ID NO.6: VIC‑CAGCAGCAC CACGGCGTTCACC‑BHQ1。 2.根据权利要求1所述的引物探针组， 其特征在于， 所述引物探针组中含有HLA ‑A02基 因和ABL1管家基因。 3.根据权利要求1所述的引物探针组， 其特征在于， 所述引物探针组中,荧光定量PCR探 针的5’端有FAM或VIC修饰及荧 光定量PCR探针的3 ’端有NFQ‑MGB或BHQ1修饰。 4.一种试剂盒， 其特征在于， 该试剂盒包括权利 要求1至3任一所述用于检测HLA ‑A02基 因的引物探针组。 5.根据权利要求4所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还包括阳性対照液和空白对 照液； 其中， 所述阳性対照液中含有质粒DNA； 所述空白对照为TE缓冲液； 所述阳性対照液中 加入有起保护质粒DNA作用的carrier  RNA溶液， 且所述carrier  RNA溶液的终浓度为10~ 50ng/ μL。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述质粒DNA中含有HLA ‑A02基因和ABL1 管家基因。 7.一种检测HLA ‑A02基因方面的检测方法， 用于非疾病诊断目的， 包括如下步骤： 获取抽提的待测样本基因 组DNA； 在同一荧光PCR扩增的反应体系中， 将待测样本基因组DNA与核苷酸如SEQ  ID NO.1至  SEQ ID NO.6所示的引物探针组的HLA ‑A02特异性引物和HLA ‑A02特异性探针按照确定比例 进行混合； 以所述待检测样本基因 组DNA为模板， 进行荧 光PCR扩增， 并收集 荧光信号； 荧光信号收集结束后， 导出数据 结果并进行分析， 判断所述检测样品基因组DNA中是否 携带HLA‑A02基因； 其中， 所述核苷酸如SEQ  ID NO.1至 SEQ ID NO.6所示的引物探针组如下： 上游引物SEQ  ID NO.1:5'‑TCCTCGTCCCCAGGCACT‑3'； 下游引物SEQ  ID NO.2: 5'‑GAACTGCGTGTCGTC CACG‑3'； 上游引物SEQ  ID NO.3: 5'‑CGGGAACCTCCTGGACTACC‑3'； 下游引物SEQ  ID NO.4: 5'‑CATGGCTGACGAGATCTGAGTG ‑3'； 探针SEQ ID NO.5: FAM‑CCGCTTCATCGCAGTG ‑MGB； 探针SEQ ID NO.6: VIC‑CAGCAGCAC CACGGCGTTCACC‑BHQ1。 8.根据权利要求7所述的检测方法， 其特征在于， 所述待测样本基因组DNA中， 稀释后 DNA终浓度至1ng/μL~5ng/μL， 所述荧光PCR扩增的反应体系中， 还包括组分TaqMan  FAST  advance Master Mix和超纯 水。 9.根据权利要求8所述的检测方法， 其特征在于， 所述荧光PCR扩增反应体系为10μL总权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114457165 A 2反应体系； 其中， 包括5 μL的TaqMan  FAST advance Master Mix， 上游引物SEQ  ID NO.1和下 游引物SEQ  ID NO.2各400nM， 上游引物SEQ  ID NO.3和下游引物SEQ  ID NO.4各300nM， 探针 SEQ ID NO.5和探针SEQ  ID NO.6各20 0nM， 1ng~20ng的基因 组DNA， 其 余用超纯 水补齐。 10.根据权利要求9所述的检测方法， 其特征在于， 所述荧光PCR扩增的反应体系， 不同 阶段的反应条件如下： 预变性处 理： 50℃下预处理2分钟； 变性处理： 95℃下 预变性5分钟； 降落PCR：  95℃预变性15秒， 65℃起， 每 隔一个循环降低0.5℃进行退火10秒； 然后72℃ 下延伸20秒； 持续执 行10个循环； 延伸处理： 95℃预变性15秒， 6 0℃下退火30秒， 收集 荧光信号； 持续执 行30个循环。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114457165 A 3