(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210391509.8 (22)申请日 2022.04.14 (71)申请人 中国农业科 学院兰州畜牧与兽药研 究所 地址 730050 甘肃省兰州市七里河区硷沟 沿335号 (72)发明人 袁超　卢曾奎　郭婷婷　杨博辉　 李建烨　刘建斌　岳耀敬　牛春娥　 孙晓萍　 (74)专利代理 机构 北京力量专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 11504 专利代理师 毛婷 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种影响高山美利奴羊羊毛纤维直径的SNP 标记及其应用 (57)摘要 本发明属于分子遗传学技术领域， 具体涉及 影响高山美利奴羊羊毛纤维直径相关的SNP标记 及其应用， 所述的SNP分子标记位于国际绵羊参 考基因组Oar_v4 .0版本第8号染色体上第 38565313个核苷酸位点G/A突变。 本发明还涉及 利用PCR技术检测上述SNP分子标记的特异性引 物对和含有该引物对的试剂盒及核苷酸多态性 检测方法， 与传统检测法相比， 该技术具有准确 性高， 检测速度快， 成本低， 结果容易判断等优 点。 将SNP位点检测用于开展高山美利奴羊羊毛 纤维直径早期选择， 缩短培育周期、 加快培育进 程， 建立一种高山美利奴羊羊毛纤维直径早期选 择技术， 减少高山美利奴羊羊毛纤维直径优良性 状的育种时间， 降低育种成本， 具有很高的应用 价值。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图1页 CN 114752680 A 2022.07.15 CN 114752680 A 1.一种检测与高山美利奴羊羊毛 纤维直径相关的SNP分子标记的试剂在检测高山美利 奴羊羊毛纤维直径中的应用， 其特征在于， 所述SNP分子标记 位于国际绵羊基因组Oar_v4.0 版本第8号染色体上第385 65313位点的碱基处； 突变碱基为G或A。 2.一种检测与高山美利奴羊羊毛 纤维直径相关的SNP分子标记的试剂在高山美利奴羊 育种中的应用， 其特征在于， 所述SNP分子标记位于国际绵羊基因组Oar_v4.0版本第8号染 色体上第385 65313位点的碱基处； 突变碱基为G或A。 3.如权利要求1或2所述的应用， 其特征在于， 所述SNP分子标记碱基为G时， 基因型为 GG； 所述SNP分子标记碱基为A时， 基因型为GA或AA； 所述基因型GA或GG的高山美利奴羊羊毛 纤维直径显著小于基因型A A。 4.如权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述试剂包括用于扩增含有所述SNP分子标 记的核苷酸序列的引物对。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述含有SNP分子标记的核苷酸序列如SEQ   ID NO.1所示， 所述的SNP分子标记位于第3 07位。 6.一种用于扩增如权利要求4所述的含有SNP分子标记的核苷酸序列的特异性引物对， 其特征在于， 所述的引物对序列为： F： 5'‑TATCTTTTAACATTGCTAGGGT‑3'； R： 5'‑GTTCACAGAGC CAAACTTG‑3'。 7.如权利要求6所述的特异性引物对在用于检测高山美利奴羊羊毛纤维直径， 或用于 高山美利奴羊育种中的应用。 8.如权利要求7所述的应用， 其特征在于， 实现检测高山美利奴羊羊毛纤维直径， 或高 山美利奴羊育种的方法包括： (1)提取高山美利奴羊血 液基因组DNA为模板DNA； (2)利用特异性引物对， 将步骤(1)获得的待测高山美利奴羊血液的基因组DNA进行PCR 扩增， 获得PCR扩增产物； (3)将步骤(2)获得的PCR扩增产物纯化， 进行基因分型检测， 所述SNP分子标记碱基为G 时， 基因型为GG； 所述SNP分子标记碱基为A时， 基因型为GA或AA； 所述基因型GA或GG的高山 美利奴羊 羊毛纤维直径显著小于基因型A A。 9.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述PCR扩增体系 25 μL： 预混液22 μL， 上、 下游 引物各1 μL， 模板DNA  1 μL。 10.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述PCR扩增程序： 98℃2min； 98℃10s， 51℃ 10s， 72℃10s， 共3 5个循环； 72℃延伸2mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114752680 A 2一种影响高 山美利奴羊 羊毛纤维直径的SNP标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子遗传学技术领域， 具体涉及影响 高山美利奴羊羊毛纤维直径相关 的SNP标记及其应用。 背景技术 [0002]羊毛是指覆盖在羊体表面的一层具有纺织价值的纤维， 是皮肤的衍生物。 羊毛是 毛纺工业的主要原料， 约占毛 纺原料的97％， 主要用来加工服装面料、 毛线、 毛毯等产品。 在 羊毛生产和育种实践 中， 羊毛性状是重要的经济性状， 主要包括毛长、 产毛量、 纤维直径、 弯 曲度、 断裂强度、 伸度、 净毛率、 剪毛量等多个指标， 与织造产品和经济效益密切相关。 由于 人口增长， 羊毛的需求已经超过了供给。 随着市场需求的变化， 生产优质羊毛已成为山 羊育 种的主要目标。 [0003]高山美利奴羊是以甘肃高山细毛羊为母本， 澳洲美利奴羊为父本， 综合利用现代 先进生物技术和育种 技术， 经过20年育成的世界首例适应海拔2400～4070m高山寒旱生态 区， 羊毛纤维直径主体为19.0～21.5 μm 的美利奴羊新品种。 高山美利奴羊的羊毛纤维细度 品质是决定其经济价值的重要指标， 并且羊毛品质的客观检验在羊毛销售中越来越受到重 视， 它与纺织性能、 育种和生产三者间结合的越来越紧密， 羊毛纤维直径是羊毛纤维检验中 最为重要的测试指标， 羊毛几乎 所有性质都与纤维直径相关或直接由纤维直径决定 。 [0004]研究表明， 羊毛性状受到遗传因素和非遗传因素的影响， 其中功能基因在毛囊发 育、 羊毛生长以及羊毛的理化特性方面发挥了重要的作用。 与传统育种方法相比， 分子标记 辅助选择方法具有许多优势， 例如可以明显缩短世代间隔， 提高选择准确性， 提前选择时 间， 同时对它低遗传力性状、 早期未表现的性状、 活体难以度量或者度量难度较大、 成本较 高的性状， 有良好的选择效果。 但是， 若想将分子标记辅助选择方法成功应用于羊毛纤维直 径性状的生产实践中， 需要寻找到调控产毛性状的关键基因或与之相连锁的分子遗传标 记。 近年来， 国内外细毛羊遗传育种专家一直致力于挖掘控制羊毛性状的候选基因或分子 标记的研究， 但至今没有建立起细毛羊毛性状分子标记体系， 且一大批调控羊毛性状的重 要基因资源仍未 得到有效的挖掘与利用。 [0005]为了加快羊毛产业的发展， 从分子水平上选择与羊毛纤维直径相关的候选基因或 与QTL相连锁的分子标记， 成为了育种工作者实现辅助选择的首要条件。 其中SNP是1996年 由美国麻省理工学院的人类基因组研究中心学者Lander 提出的一类 分子遗传标记， 主要 是 指基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态 性。 SNP表现出的多态 性仅涉及 到单个碱基的变异， 表现是有转换、 颠换、 插入和缺失等。 SNP分子标记具有遗传稳定、 突变 率低、 便于自动化检测等优点。 因此， 寻找与羊毛纤维直径紧密连锁的分子辅助标记基因， 筛选调控羊毛纤维直径性状的功能基因， 是实现现代分子育种技术与常规育种技术有机结 合， 提高繁殖 经济效率的有益手段。 [0006]本发明发现了一种影响高山美利奴羊羊毛纤维直径的SNP分子标记， 位于国际绵 羊基因组Oar_v4.0版本第8号染色体上第38565313位点的碱基处； 突变碱基为G或A。 所述说　明　书 1/6 页 3 CN 114752680 A 3