(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210390181.8 (22)申请日 2022.04.14 (71)申请人 深圳闪量科技有限公司 地址 518057 广东省深圳市光明区凤 凰街 道凤凰社区观光路招商局光明科技园 A3栋C705.B6栋4C.B5栋A201 (72)发明人 莫茜　陶悦　林协　安亦泰　戴珩　 岳敏　 (74)专利代理 机构 上海十蕙一兰知识产权代理 有限公司 313 31 专利代理师 刘秋兰 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) C12R 1/35(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸 道病原体核酸检测试剂盒 (57)摘要 本发明公开一种基于普通qPCR检测平台的 同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒， 包 括下列互不混合： 反应液A、 反应液B和反应液C。 反应液A包括甲型流感病毒、 乙型流感病毒和呼 吸道合胞病毒的正反向引物及荧光探针； 反应液 B包括人副流感病毒、 肺炎支原体和新型冠状病 毒的正反向引物及荧光探针； 反应液C包括人呼 吸道腺病毒、 人呼吸道鼻/肠病毒及百日咳杆菌 的正反向引物及荧光探针。 在同一反应液中不同 病原体所使用的荧光探针的荧光基团各不相同。 本发明的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种 呼吸道病原体核酸检测试剂盒具有高特异性和 高灵敏度， 适用于对呼吸道病原体的快速 检测。 权利要求书3页 说明书14页 序列表14页 附图5页 CN 114921587 A 2022.08.19 CN 114921587 A 1.一种基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒， 其特征 在于包括互不混合的混合液： 反应液A、 反应液B和反应液C； 所述反应液A包括反应预混液、 FluA ‑F正向引物、 FluA ‑R反向引物、 FluA ‑P荧光探针、 FluB‑F正向引物、 FluB ‑R反向引物、 FluB ‑P荧光探针、 RSVA ‑F正向引物、 RSVA ‑R反向引物、 RSVA‑P荧光探针、 RSVB ‑F正向引物、 RSVB ‑R反向引物、 RSVB ‑P荧光探针； 所述反应液B包括反应预混液、 hPIV1 ‑F上游引物、 hPIV1 ‑R下游引物、 hPIV1 ‑P荧光探 针、 hPIV2 ‑F正向引物、 hPIV2 ‑R反向引物、 hPIV2 ‑P荧光探针、 hPIV3 ‑F正向引物、 hPIV3 ‑R反 向引物、 hPIV3 ‑P荧光探针、 hPIV4 ‑F正向引物、 hPIV4 ‑R反向引物、 hPIV4 ‑P荧光探针、 MP ‑F正 向引物、 MP ‑R反向引物、 MP ‑P荧光探针、 SARS ‑CoV‑2‑ORF正向引物、 SARS ‑CoV‑2‑ORF反向引 物、 SARS‑CoV‑2‑ORF荧光探针、 SARS ‑CoV‑2‑N正向引物、 SARS ‑CoV‑2‑N反向引物、 SARS ‑CoV‑ 2‑N荧光探针、 SARS ‑CoV‑2‑E正向引物、 SARS ‑CoV‑2‑E反向引物、 SARS ‑CoV‑2‑E荧光探针； 所述反应液C包括反应预混液、 HADV ‑F上游引物、 HADV ‑R1下游引物、 HADV ‑R2下游引物、 HADV‑R3下游引物、 HADV ‑R4下游引物、 HADV ‑P荧光探针、 HRV /HEV‑F正向引物、 HRV /HEV‑R1反 向引物、 HRV /HEV‑R2反向引物、 HRV /HEV‑R3反向引物、 HRV /HEV‑R4反向引物、 HRV /HEV‑P荧光 探针、 BP‑F正向引物、 BP ‑R反向引物、 BP ‑P荧光探针。 2.如权利要求1所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测 试剂盒， 其特 征在于 所述反应液A还 包括RP‑F上游引物、 RP ‑R下游引物和RP ‑P荧光探针作为内参对照； 所述反应液B还 包括RP‑F上游引物、 RP ‑R下游引物和RP ‑P荧光探针作为内参对照； 所述反应液C还 包括RP‑F上游引物、 RP ‑R下游引物和RP ‑P荧光探针作为内参对照。 3.如权利要求2所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测 试剂盒， 其特 征在于所述引物对和荧 光探针具体如下： 如SEQ ID NO:1所示的FluA ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:2所示的FluA ‑R反向引物； 如SEQ   ID NO:3所示的FluA ‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:4所示的FluB ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:5所示的FluB ‑R反向引物； 如SEQ   ID NO:6所示的FluB ‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:7所示的RSVA ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:8所示的RSVA ‑R反向引物； 如SEQ   ID NO:9所示的RSV A‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:10所示的RSVB ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:11所示的RSVB ‑R反向引物； 如 SEQ ID NO:12所示的RSVB ‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:13所示的hPIV1 ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:14所示的hPIV1 ‑R反向引物； 如SEQ ID NO:15所示的hPIV1 ‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:16所示的hPIV2 ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:17所示的hPIV2 ‑R反向引物； 如SEQ ID NO:18所示的hPIV 2‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:19所示的hPIV3 ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:20所示的hPIV3 ‑R反向引物； 如SEQ ID NO:21所示的hPIV3 ‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:22所示的hPIV4 ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:23所示的hPIV4 ‑R反向引物； 如SEQ ID NO:24所示的hPIV4 ‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:25所示的MP ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:26所示的MP ‑R反向引物； 如SEQ  权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114921587 A 2ID NO:27所示的MP ‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:28所示的SARS ‑CoV‑2‑ORF‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:29所示的SARS ‑ CoV‑2‑ORF‑R反向引物； 如SEQ  ID NO:30所示的SARS ‑CoV‑2‑ORF‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:31所示的SARS ‑CoV‑2‑N‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:32所示的SARS ‑CoV‑ 2‑N‑R反向引物； 如SEQ  ID NO:33所示的SARS ‑CoV‑2‑N‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:34所示的SARS ‑CoV‑2‑E‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:35所示的SARS ‑CoV‑ 2‑E‑R反向引物； 如SEQ  ID NO:36所示的SARS ‑CoV‑2‑E‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:37所示的HADV ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:38所示的HADV ‑R1反向引物， SEQ ID NO:39所示的HADV ‑R2反向引物， SEQ  ID NO:40所示的HADV ‑R3反向引物， SEQ  ID  NO:41所示的HADV ‑R4反向引物； 如SEQ  ID NO:42所示的HADV ‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:43所示的HRV/HEV ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:44所示的HRV/HEV ‑R1反向 引物； 如SEQ  ID NO:45所示的HRV/HEV ‑R2反向引物； 如SEQ  ID NO:46所示的HRV/HEV ‑R3反 向引物； 如SEQ  ID NO:47所示的HRV /HEV‑R4反向引物； 如SEQ  ID NO:48所示的HRV /HEV‑P荧 光探针； 如SEQ ID NO:49所示的BP ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:50所示的BP ‑R反向引物； 如SEQ   ID NO:51所示的BP ‑P荧光探针； 如SEQ ID NO:52所示的RP ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:53所示的RP ‑R反向引物； 如SEQ   ID NO:54所示的RP ‑P荧光探针。 4.如权利要求2或3所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检 测试剂盒， 其特 征在于 反应液A中， 甲型流感病毒、 乙型流感病毒、 呼吸道合胞病毒与人保守基因RP片段这四 者荧光探针的荧 光基团各不相同； 反应液B中， 人副流感病毒、 肺炎支原体、 新型冠状病毒与人保守基因RP片段这四者荧 光探针的荧 光基团各不相同； 反应液C中， 人呼吸道腺病毒、 人呼吸道鼻/肠病毒、 百日咳杆菌与人保守基因RP片段这 四者荧光探针的荧 光基团各不相同。 5.如权利要求4所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测 试剂盒， 其特 征在于 反应液A中， 甲型流感病毒、 乙型流感病毒、 呼吸