(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210432108.2 (22)申请日 2022.04.22 (71)申请人 中国科学院南海 海洋研究所 地址 511458 广东省广州市南沙区海 滨路 1119号 (72)发明人 王艳红　陈廷　罗鹏　胡超群　 任春华　江晓　张鑫　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 陈洁娣　刘明星 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于鉴定凡纳滨对虾特定抗病品系的 EST-SSR标记及应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于鉴定凡纳滨对虾特 定抗病品系的EST ‑SSR标记Lv ‑Vp051及其应用， 属于分子生物学技术领域。 本发明提供了如SEQ   ID NO.1～3所示的EST ‑SSR标记及其扩增引物。 在凡纳滨对虾特定的抗病品系中可以扩增出 144bp和145bp的特异条带， 而在凡纳滨对虾普 通 品系中扩增出的条带为150bp。 因此本发明的Lv ‑ Vp051标记可以用于凡纳滨对特定抗病品系的鉴 定、 遗传多样性评估， 以及抗病育种的亲本选择 等方面， 为今后凡纳滨对虾抗病育种提供理论基 础。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 附图2页 CN 114891896 A 2022.08.12 CN 114891896 A 1.一种用于鉴定凡纳滨对虾特定抗病品系的EST ‑SSR标记， 其特征在于， 所述的EST ‑ SSR标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.一种权利要求1所述的EST ‑SSR标记的检测引物， 其特 征在于， 所述引物为： Lv‑Vp051‑F： 5'‑AAACCAGATAATGCACTG GGAA‑3'； Lv‑Vp051‑R： 5'‑GTGGTAGTGCTG GTAGTGGTCAT‑3'。 3.检测权利要求1所述的EST ‑SSR标记的试剂在制备鉴定凡纳滨对虾特定抗病品系的 产品中的应用。 4.权利要求1所述的EST ‑SSR标记或权利要求2所述的检测引物在制备鉴定凡纳滨对虾 特定抗病品系的检测试剂盒中的应用。 5.一种鉴定凡纳滨对虾特定抗病品系的检测试剂 盒， 其特征在于， 包含权利要求2所述 的检测引物。 6.权利要求1所述的EST ‑SSR标记、 权利 要求2所述的检测引物或权利 要求5所述的检测 试剂盒在鉴定凡纳滨 对虾特定抗病品系中的应用。 7.权利要求1所述的EST ‑SSR标记、 权利 要求2所述的检测引物或权利 要求5所述的检测 试剂盒在凡纳滨 对虾分子标记辅助育种中的应用。 8.权利要求1所述的EST ‑SSR标记、 权利 要求2所述的检测引物或权利 要求5所述的检测 试剂盒在凡纳滨 对虾种群遗传结构分析中的应用。 9.一种鉴定凡纳滨对虾抗病品系的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 提取待检样品的 DNA， 使用权利要 求2所述的检测引物Lv ‑Vp051‑F/Lv‑Vp051‑R进行PCR扩增， 若扩增出 144bp 和145bp的特异条 带， 则判断待检样品是凡纳滨 对虾特定抗病品系。 10.权利要求9所述的鉴定方法在凡纳滨对虾种群遗传结构分析、 分子标记辅助育种 和/或凡纳滨 对虾抗病性品种选 育中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114891896 A 2一种用于鉴定凡纳滨对虾 特定抗病品系 的EST‑SSR标记及 应用 技术领域 [0001]本发明涉及海洋动 物分子生物学技术领域， 具体涉及一种用于鉴定凡纳滨对虾特 定抗病品系的EST ‑SSR标记及应用。 背景技术 [0002]凡纳滨对虾(Litopenaeus  vannamei)俗称南美白对虾， 原种分布于中南美洲从墨 西哥到智利的太平洋沿岸海域， 是典型 的热带性对虾。 目前凡纳滨对虾是世界第一养殖虾 类， 占全球养殖对虾产量70％和我国对虾养殖产量80％以上。 根据FAO统计， 2018年凡纳滨 对虾养殖总产量高达497多万吨， 占所有养殖对虾总产量的80％以上(FAO,2018 )。 根据 《2021中 国渔业统计年鉴》 ， 2020年我国凡纳滨对虾养殖年产量186万多吨， 占全国对虾 年产 量的86％， 虾 苗生产量 15000多亿尾， 凡纳滨对虾养殖产业已成为我国渔业 发展的支柱性产 业。 我国凡纳 滨对虾的人工养殖近10年来受到病毒、 细菌和寄生虫等病害的困扰， 使 得我国 凡纳滨对虾养殖病害的防控更加困难。 多数现有凡纳滨对虾抗病力显著偏低， 死亡率居高 不下， 造成巨大经济损失， 严重制约了我国凡纳滨对虾养殖产业的持续健康发展。 因此， 定 向选择抗病力强的品系是我们选 育的重要目标。 [0003]传统的育种方法周期长、 效率低。 随着现代生物技术和遗传学技术在水产领域的 快速转化， 以性状相关功能基因为基础的分子标记技术成为水产遗传育种的关键技术之 一。 表达序列标签(Expressed  Sequence  Tag， EST)是对cDNA文库随机选择的cDNA克隆进行 大规模测序所获得的SSR序列， 反应 mRNA的信息。 EST ‑SSR标记的开发既可以节省传统SSR所 需的人力物力， 又 可以结合功能基因的注释， 从基因功能的角度开发标记。 [0004]因为EST‑SSR来自于转录组数据， 保守性比较高， 具有方便、 快捷、 多态性分布等特 点， 因此广泛应用在动植物的物种鉴定、 遗传分化等方面。 本发 明主要利用转录组开 发的凡 纳滨对虾EST ‑SSR标记， 对抗病成活率表现不同的品系进 行鉴定， 对凡纳滨对虾的抗病育种 具有重大的应用价 值。 发明内容 [0005]本发明的目的在于解决现有技术存在的问题， 提供一种用于鉴定凡纳滨对虾特定 抗病品系的EST ‑SSR标记及其应用。 [0006]本发明的第一个目的是提供一种用于鉴定凡纳滨对虾特定抗病品系的EST ‑SSR标 记， 该EST‑SSR标记的位点是Lv ‑Vp051， 所述的ES T‑SSR标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所 示。 [0007]本发明的第二个目的是提供一种用于鉴定凡纳滨对虾特定抗病品系的EST ‑SSR标 记的检测引物， 所述引物为： [0008]Lv‑Vp051‑F： 5'‑AAACCAGATAATGCACTG GGAA‑3'(SEQ ID NO.2所示)； [0009]Lv‑Vp051‑R： 5'‑GTGGTAGTGCTG GTAGTGGTCAT‑3'(SEQ ID NO.3所示)。说　明　书 1/3 页 3 CN 114891896 A 3