(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210447592.6 (22)申请日 2022.04.26 (71)申请人 江苏康为世纪生物科技股份有限公 司 地址 225300 江苏省泰州市药城大道一 号 TQB大楼4楼 申请人 江苏健为诊断科技有限公司 (72)发明人 尤慧　杨希寅　马竣　王春香　 (74)专利代理 机构 南京禾祁专利代理事务所 (普通合伙) 32462 专利代理师 孙建朋 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01)C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药基因 突变试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种检测粪便样本中幽门螺 杆菌耐药基因突变试剂盒， 包括检测幽门螺杆菌 23S rRNA基因2142、 2143位点的A2142G、 A2143G 突变的引物 探针， 检测幽门螺 杆菌gyrA 基因87位 点的N87I、 N87K突变的引物探针， 检测幽门螺杆 菌gyrA基因91位点的D91N、 D91Y、 D91G突变的引 物探针， 检测23S  rRNA外控的引物探针， 检测 gyrA外控的引物探针， DNA聚合酶， 幽门螺 杆菌阳 性质控参考品和幽门螺杆菌阴性质控参考品。 本 发明检测试剂盒， 实现多种突变位点的检测， 特 异性强， 检测灵敏度可达1％； 非侵入性取样， 减 少了患者的痛苦； 实际组分改进还增加了检测效 果的灵敏度和特异性。 权利要求书2页 说明书7页 序列表5页 附图2页 CN 114592081 A 2022.06.07 CN 114592081 A 1.一种检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药基因突变试剂盒， 其特征在于， 包括检测幽门 螺杆菌23S  rRNA基因2142、 2143位点的A2142G、 A2143G突变的引物探针， 检测 幽门螺杆菌 gyrA基因87位点的N87I、 N87K突变的引物探针， 检测幽门螺杆菌gyrA基因91位点的D91N、 D91Y、 D91G突变的引物探针， 检测23S  rRNA外控的引物探针， 检测gyrA外控的引物探针， DNA 聚合酶， 幽门螺杆菌阳性质控参 考品和幽门螺杆菌阴性质控参 考品。 2.根据权利要求1所述的一种检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药基因突变试剂盒， 其特 征在于， 所述检测幽门螺杆菌23S  rRNA基因2142位点的A2142G突变的引物序列如SEQ  ID  NO:1、 SEQ  ID NO:2所示， 探针序列如SEQ  ID NO:3所示； 所述检测幽门螺杆菌23S  rRNA基因 2143位点的A2143G突变的引物序列如SEQ  ID NO:7、 SEQ  ID NO:8所示， 探针序列如SEQ  ID  NO:3所示。 3.根据权利要求1所述的一种检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药基因突变试剂盒， 其特 征在于， 所述检测幽门螺杆菌gyrA基因87位点的N87I突变的引物序列如SEQ  ID NO:9、 SEQ   ID NO:10所示， 探针序列如SEQ  ID NO:11所示； 所述检测幽门螺杆菌gyrA基因87位点的 N87K突变的引物序列如SEQ  ID NO:12、 SEQ  ID NO:13所示， 探针序列如SEQ  ID NO:11所示。 4.根据权利要求1所述的一种检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药基因突变试剂盒， 其特 征在于， 所述检测幽门螺杆菌gyrA 基因91位点的D91N突变的引物序列如SEQ  ID NO:14、 SEQ   ID NO:15所示， 探针序列如SEQ  ID NO:11所示； 所述检测幽门螺杆菌gyrA基因91位点的 D91Y突变的引物序列如SEQ  ID NO:16、 SEQ  ID NO:17所示， 探针序列如SEQ  ID NO:11所示； 所述检测幽门螺杆菌gyrA 基因91位点的D91G突变的引物序列如SEQ  ID NO:18、 SEQ  ID NO: 19所示， 探针序列如SEQ  ID NO:11所示。 5.根据权利要求1所述的一种检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药基因突变试剂盒， 其特 征在于， 所述检测23S  rRNA外控的引物序列如SEQ  ID NO:20、 SEQ ID NO:21所示， 探针序列 如SEQ ID NO:3所示。 6.根据权利要求1所述的一种检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药基因突变试剂盒， 其特 征在于， 所述检测gyrA外控的引物序列如SEQ  ID NO:22、 SEQ  ID NO:23所示， 探针序列如 SEQ ID NO:11所示。 7.根据权利要求1所述的一种检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药基因突变试剂盒， 其特 征在于， 所述幽门螺杆菌阳性质控参考品为插入幽门螺杆菌23 s rRNA基因和gyrA基因的载 体质粒， 所述23s  rRNA基因序列如SEQ  ID NO:24所示， 所述gyrA基因序列如SEQ  ID NO:25 所示。 8.根据权利要求1所述的一种检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药基因突变试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒还包括检测内参质控基因的引物探针， 所述内参质控基因为人ACTB基 因； 所述检测内参质控基因的引物序列如SEQ  ID NO:4、 SEQ  ID NO:5所示， 探针序列如SEQ   ID NO:6所示。 9.根据权利要求1至8任意一项所述的一种检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药基因突变 试剂盒， 其特 征在于， 所述引物3 ’端引入硫代修饰， 所述引物、 探针浓度为10 0‑400nM。 10.根据权利要求1至8任意一项所述的一种检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药基因突变 试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括buffer缓冲液和dNTP， buffer组分包括Tris ‑HCl、 土温、 甘油、 氯化镁、 硫酸铵、 氯化钾、 PVP、 BSA， 浓度分别为Tris ‑HCl 10‑100mM， 土温权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114592081 A 20.01％‑0.05％， 甘油1％ ‑10％， 氯化镁1 ‑5mM， 硫酸铵10 ‑100mM， 氯化钾10 ‑100mM， PVP浓度 0.1％‑0.5％， BSA浓度0.01％ ‑0.3％， 其中Tris ‑HClpH8.0‑8.5。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114592081 A 3