(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210456695.9 (22)申请日 2022.04.27 (71)申请人 江苏省人民医院 （南京医科 大学第 一附属医院） 地址 210000 江苏省南京市 鼓楼区广州路 300号 (72)发明人 刘蔚　蔡卫华　杨思亭　葛旭辉　 唐鹏宇　 (74)专利代理 机构 南京业腾知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 32321 专利代理师 杨帆 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 9/48(2006.01) (54)发明名称 一种与人骨肉瘤相关的分子标记物USP13及 其应用 (57)摘要 本发明公开了一种与人骨肉瘤相关的分子 标记物USP13， 其氨基酸序列如SEQ  ID No.1所 示。 发明人 实验研究发现： USP13在骨肉瘤中高度 表达， 并且提示不良预后， 敲低骨肉瘤细胞中 USP13的表达可以降低骨肉瘤细胞体外增殖、 克 隆形成能力、 侵袭转移能力， 且可 以降低骨 肉瘤 体内增殖及侵袭转移能力； USP13蛋白可以与 METTL3蛋白相结合并降低其泛素化水平； METTL3 在骨肉瘤中高度表达， 并且与USP13表达量呈明 显正相关。 这些结果表明USP13可以作为骨肉瘤 的分子标志物， 通过定量检测该分子标志物， 可 用于骨肉瘤诊断、 疗效评价， 这对骨肉瘤的早期 诊断具有重要意 义， 可以提高患者总体生存率。 权利要求书1页 说明书9页 序列表4页 附图7页 CN 114774547 A 2022.07.22 CN 114774547 A 1.一种与人骨肉瘤相关的分子标记物USP13， 其特征在于， 所述USP13的氨基酸序列如 SEQ ID No.1所示。 2.分子标记 物USP13作为检测靶标在制备骨肉瘤诊断试剂或疗效评价产品中的应用。 3.检测权利要求1所述分子标记物USP13的表达水平 的试剂在制备骨肉瘤诊断试剂或 疗效评价产品中的应用。 4.如权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述检测分子标记物USP13的表达水平的试 剂包括特异性引物， 所述特异性引物为US P13‑F和USP13‑R： USP13‑F:5’ ‑CAAAAGATCGCCTGATGAACCA‑3’ USP13‑R:5’ ‑TGATCCAGTTGAAGGCCACC‑3’。 5.一种用于骨肉瘤诊断或疗 效评价的试剂 盒， 其特征在于， 包括检测分子标记物USP13 的表达水平的试剂， 所述US P13的氨基酸序列如SEQ  ID No.1所示。 6.如权利要求5所述用于骨肉瘤诊断或疗 效评价的试剂 盒， 其特征在于， 所述检测分子 标记物USP13的表达水平的试剂包括特异性引物， 所述特异性引物为US P13‑F和USP13‑R： USP13‑F:5’ ‑CAAAAGATCGCCTGATGAACCA‑3’ USP13‑R:5’ ‑TGATCCAGTTGAAGGCCACC‑3’。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774547 A 2一种与人骨肉瘤相关的分子标记物USP13及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及一种与人骨肉瘤相关的分子标记物 USP13及其应用。 背景技术 [0002]骨肉瘤(Osteosarcoma， OS)是一种起源于间质细胞的恶性骨肿瘤， 主要发生于儿 童和青少年中， 约占小儿患者所有恶性肿瘤的2.4％， 病 死率极高。 骨肉瘤常发生于胫骨近 端、 肱骨近端和股骨远端的干骺端区域， 具有高度侵袭性， 中晚期常伴有肺部转移。 尽管过 去数十年中医疗技术包括手术方式、 理念及放化疗技术得到迅速发展， 由于肺转移及耐药 等原因， 骨肉瘤的五年生存率依然很低。 实际上， 由于目前仍然没有有效的治疗方法， 伴有 转移的骨肉瘤患者的总体生存率相当低， 大约在10％ ‑20％之间。 因此， 充分理解骨肉瘤发 生发展的深层生物学机制， 早期筛查诊断骨肉瘤具有重要意 义。 [0003]目前骨肉瘤的确诊方法为穿刺活检或手术切取活检， 主要是根据细胞的异型性及 染色体数目和结构异常确诊骨肉瘤， 经典的骨肉瘤具有广泛的免疫组化表达谱， 诊断意义 有限， 主要检测指标有Osteocalcin， Osteonectin， Osteopontin， Vi m， S100， Actin， SMA， C K， NSE， CD99， SATB2， MDM2， CDK4， Ki67及P53， 但都缺乏特异性， 因此发展新的治疗手段和特异 性高的分子诊断标记 物成为防治骨肉瘤的迫切需求。 [0004]泛素化修饰是最常见的蛋白质翻译后修饰之一， 其通过调节蛋白质稳定性、 信号 传递等过程参与了一系列生物活动。 如同其他翻译后修饰， 泛 素化也是可逆的过程， 可被某 些蛋白酶逆转， 这些蛋白酶统称为去泛素化酶(deubiquitinating  enzymes， DUBs)， 目前， 已鉴定出超过100种D UBs， 其中， 泛素特异性蛋白酶(ubiquitin ‑specific  protease， USPs) 是最大的去泛素化酶家族。 目前， 已有研究证明DUBs在数种恶性肿瘤中异常表达且在其发 生发展中通过调控肿瘤细胞一系列生物学行为 发挥重要作用。 然而， 到目前为止， 关于骨肉 瘤中DUBs的相关研究甚少。 [0005]本研究旨在 提供一种与人骨肉瘤相关的分子标记物， 通过检测骨肉瘤患者分子病 理变化， 可以做到早期筛查及辅助诊断， 从而提高骨肉瘤患者 早期诊断及总体生存率。 发明内容 [0006]本发明的目的在于解决现有技术中骨肉瘤诊断技术的不足， 提供一种与人骨肉瘤 相关的分子标记 物及其在制备骨肉瘤早期诊断或疗效评价产品中的应用。 [0007]技术方案 [0008]一种与人骨肉瘤相关的分子标记物， 所述分子标志物为USP13， 所述USP13的氨基 酸序列如SEQ  ID No.1所示。 [0009]SEQ ID No.1: [0010]MQRRGALFGMP GGSGGRKMAAGDIGELLVPHMPTIRVPRS GDRVYKNECAFSYDSPNSEGGLYVCMNT FLAFGREHVERHFRKTGQSVYMHLKRHVREKVRGASGGALPKRRNS KIFLDLDTDDDLNSDDYEYEDEAKLVIFPD说　明　书 1/9 页 3 CN 114774547 A 3