(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210464909.7 (22)申请日 2022.04.29 (71)申请人 江苏吉诺思美精准医学 科技有限公 司 地址 210000 江苏省南京市南京经济技 术 开发区恒泰路汇智科技园A 9栋 (72)发明人 高如霞　孙克京　洪兵　邢红兵　 (74)专利代理 机构 南京中律知识产权代理事务 所(普通合伙) 32341 专利代理师 沈振涛 (51)Int.Cl. C12Q 1/6858(2018.01) C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种多重荧光pcr 检测EGFR基因突变的引物 和探针组合物、 试剂盒和检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种多重荧光PCR检测EGFR基 因突变的引物和探针组合物、 试剂盒和检测方 法， 所述引物和探针组合物包 括EGFR基因突变检 测特异性引物对、 EGFR基因特异性探针、 扩增阻 断探针和内控系统， 其序列如SEQ  ID NO 1至SEQ  ID NO 44所示。 本发明在3个反应管内可同时检 测EGFR基因32种突变， 检测灵敏度为1 ％， 操作简 单， 节约成本， 样本量要求低， 临床应用范围广。 本发明可检测新鲜组织样本， FFPE样本及胸腹水 样本。 权利要求书3页 说明书12页 序列表7页 附图4页 CN 114592045 A 2022.06.07 CN 114592045 A 1.一种多重荧光pcr检测EGFR基因突变的引物和探针组合物， 其特征在于， 所述组合物 包括19del、 S768I、 L858R、 EGF R 20ins、 T79 0M、 L861Q、 G7 19X及内控的引物和探针， 上述引物 和探针分为组1、 组2和组3， 如下表所示： 权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114592045 A 2。 2.一种多重荧光pcr检测EGFR突变的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含权利要求1 所述的引物和探针组合物。 3.根据权利要求2所述的多重荧光pcr检测EGFR突变的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包含： NEB universal  probe qPCR master mix、 权利要求1所述的引物和探针组合物、 阳性 对照和阴性对照。 4.根据权利要求3所述的多重荧光pcr检测EGFR突变的试剂盒， 其特征在于， 所述阳性 对照包括质粒DNA和野生型DNA混合物； 所述阴性对照包括无核酸酶水。 5.权利要求1所述的引物和探针组合物， 或权利要求2所述的试剂盒在基于多重荧光 pcr检测EGFR突变中的应用。 6.一种多重荧 光pcr检测EGFR突变的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)准备样品； (2)构建多重荧光PCR扩增反应体系， 包括分别由权利要求1所述的组1、 组2和组3构成 的三种反应 体系， 进行PCR反应； (3)根据荧 光PCR扩增仪 显示的△ct值判定检测结果。 7.根据权利要求6所述的多重荧光pcr检测EGFR突变的方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述样品包括组织样本， F FPE样本或胸腹水样本 。 8.根据权利要求6所述的多重荧光pcr检测EGFR突变的方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 所述三种反应 体系包括： 19del&L858R体系： 权利要求1所述的组1、 NEB  universalprobeqPCR  mastermix、 样本； L858R&EGFR  20ins体系： 权利要求1所述的组2、 NEB  universalprobeqPCR mastermix、 样本； T790M&L861Q&G719体系： 权利要求1所述的组3、 NEB  universalprobeqPCR mastermix、 样本。 9.根据权利要求6所述的多重荧光pcr检测EGFR突变的方法， 其特征在于， 步骤(2)中，权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114592045 A 3