(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210521337.1 (22)申请日 2022.05.13 (71)申请人 苏州大学 地址 215000 江苏省苏州市吴中区石湖西 路188号 (72)发明人 甄晓媛　赵文锋　李立娟　高玉振　 (74)专利代理 机构 苏州市中南伟业知识产权代 理事务所(普通 合伙) 32257 专利代理师 王玉仙 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 基于METT L16基因多态性位点预测心源性猝 死的分子标记及试剂盒 (57)摘要 本发明涉及一种基于METT L16基因多态性位 点预测心源性猝死的分子标记及试剂盒， 分子标 记为METTL16基因的rs58928048位点， 该位点插 入或缺失碱基TGTCTG， 插入型指示心源性猝死 发 病风险高。 本发明通过对METTL16基因的 rs58928048位点的插入缺失多态性与心源性猝 死表型相关性的研究， 提供了一种与心源性猝死 相关的多态 性分子标记， 并进一步提供了一种心 源性猝死检测试剂盒， 从而 得到检测个体的心源 性猝死发病风险。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 114736960 A 2022.07.12 CN 114736960 A 1.一种检测心源性猝死发病风险的插入缺失多态性分子标记， 其特征在于： 所述插入 缺失多态性分子标记为M ETTL16基因的rs589 28048位点， 该位点插入或缺失碱基TGTCTG。 2.根据权利 要求1所述的插入缺失多态性分子标记， 其特征在于： 插入碱基TGTCTG指示 心源性猝死发病风险高。 3.METTL16基因插入缺失多态性位点在制备心源性猝死检测试剂盒中的应用， 其特征 在于： 所述心源性猝死检测试剂盒用于检测M ETTL16基因rs589 28048位点的基因型。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于： 所述心源性猝死检测试剂盒中包括扩增 METTL16基因rs589 28048位点的引物。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于： 扩增METTL16基因rs58928048位点的引物 包括有义引物和反义引物， 所述有义引物的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述反义引物 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 6.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于： 所述心源性猝死检测试剂 盒中还包括用于 PCR扩增和毛细管电泳的组件。 7.扩增METTL16基因rs589 28048位点的引物在制备心源性猝死检测试剂盒中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于： 扩增METTL16基因rs58928048位点的引物 包括有义引物和反义引物， 所述有义引物的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述反义引物 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 9.一种基于METTL16基因插入缺失多态性的心源性猝死检测试剂盒， 其特征在于： 所述 心源性猝死检测试剂盒用于检测METTL16基因rs58928048位点的基因型， 包括用于扩增 METTL16基因rs589 28048位点的引物。 10.根据权利要求9所述的心源性猝死检测试剂盒， 其特征在于： 所述引物包括有义引 物和反义引物， 所述有义引物的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述反义引物的核苷 酸序 列如SEQ ID NO.2所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114736960 A 2基于METTL16基因多态性位点预测心源性猝死的分子标记及 试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 尤其涉及一种基于METTL16基因多态性位点预测心源 性猝死的分子标记及试剂盒。 背景技术 [0002]心源性猝死(sudden  cardiac death， SCD)是指由心脏原因引起的突发性的非预 料死亡， 表现为短期内发生的突 发意识丧失及循环、 呼吸骤停。 “短期”规定为有目击者情况 下小于1小时内， 无目击者时则为2 4小时。 以往 大量研究表明， SCD的死因多为冠状动脉粥样 硬化性心脏病或致命性心律 失常。 前者多 见于高龄人群， 后者则多 见于年轻人。 考虑到死后 的尸体解剖和组织学检查难以找到准确的死因， 为了能准确诊断SCD， 揭开SCD发生的分子 机制、 寻找SCD的遗传标记迫在眉睫。 [0003]过去针对SCD诊断领域的研究主要集中于对重要蛋白编码基因的编码区突变与猝 死的关联性分析， 然而相关的突变不仅数量有限， 普通群体极低的基因频率难以完全解释 相对而言较高的猝死发生率。 随着全基因组关联研究及二代测序技术的发展， 越来越多的 遗传标记被发现参与SCD的调控。 SCD遗传标记的识别能够进一步深入了解其潜在机制， 优 化SCD的风险分层， 并为分子诊断和预防提供强有力的理论依据。 考虑到3'UTR对基因表达 起到重要的调控作用， 我们把 目光投向了这片区域内的遗传多态， 通过病例对照研究分析 相关基因中3'UTR的遗传多态性与SCD的易感性之间的关联， 为建立可用于SCD风险评估的 基因多态性检测体系提供了可能。 [0004]N6‑甲基腺苷(m6A)是真核细胞中最普遍和最丰富的内部转录后RNA修饰类型， 由 其效应蛋白甲基转移酶(METTL16、 METTL3、 METTL14等)， 去甲基酶(FTO、 ALKBH5等)， 和相关 结合蛋白(YTHDF1 –3)可逆地、 动态的调节。 m6A在基因表达调节、 mRNA稳定性和稳态、 各种疾 病等中发挥着重要作用。 随着科学技术的发展， 越来越多的研究发现m6A相关蛋白基化异常 是心血管疾病发展的标志， 包括心肌肥厚、 心力衰竭、 心肌梗塞、 缺血性心脏病、 主动脉瘤、 血管钙化、 肺动脉高压等。 同时使用全基因组关联研究(GWAS)也已经确定了许多与心血管 病相关的m6A ‑SNPs， 并探索了遗传功能机制。 如 rs9847953和rs197922 被鉴定为潜在的功能 变异， 有助于调节血压。 还有研究表明rs12286在机制上可能影响m6A的甲基化水平， 并与 SCD显著相关。 总的来说， m6A甲基化调控对维持心脏生理功能至关重要， m6A修饰可能有助 于进一步认识心血管发病机制的分子 机制， 并可能成为未来潜在的生物标志 物。 [0005]METTL16是一种新的m6A甲基转移酶， 包含I类甲基转移酶的Rossm ann样折叠， 通过 调节SAM合成酶或者其他因子参与 m6A修饰。 研 究表明METTL16在肿瘤(如肝癌)的发生发展 中发挥了重要的促癌基因的作用。 MetTLL16低表达也已在卵巢癌中确定(OC)， 且METTL16介 导的RNA结构甲基化是小鼠胚胎发育过程中的重要参与者， 另外有猜测表明MetT16/Malat1 相互作用可能与血 管生成有关。 [0006]现有技术中， 并没有对rs58928048插入缺失多态与SCD相关性的研究报道， 也没有说　明　书 1/4 页 3 CN 114736960 A 3