ICS 65.020.20 CCS B 35 江 DB36 西 省 地 方 标 准 DB36/T 1654—2022 饮用菊花脱毒原种苗繁育技术规程 Technical regulations of breeding of chrysanthemum virus-free seed seedlings 2022 - 09 - 26 发布 江西省市场监督管理局 2023 - 04 - 01 实施 发 布 DB36/T 1654—2022 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 基本要求 .......................................................................... 2 5 网室建造与隔离 .................................................................... 2 6 原原种繁殖 ........................................................................ 2 7 原原种鉴定 ........................................................................ 3 8 原种网室繁殖 ...................................................................... 3 9 质量检测 .......................................................................... 4 附录 A（规范性）RNA 病毒的反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法 ...................... 5 I DB36/T 1654—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及本专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江西省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：江西省农业科学院蔬菜花卉研究所。 本文件主要起草人：汤泳萍、叶艳英、胡文亭、张冰冰、周劲松、尹玉玲、程正新、谢启鑫、罗绍 春。 II DB36/T 1654—2022 饮用菊花脱毒原种苗繁育技术规程 1 范围 本文件规定了饮用菊花（Chrysanthemum morifolium (Ramat.) TzveL.）脱毒原种苗的范围、规范 性引用文件、术语和定义、基本要求、网室建造与隔离、原原种繁殖、原原种鉴定、原种网室繁殖、 质量检测等要求。 本文件适用于饮用菊花脱毒原种苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 GB/T 51057 种植塑料大棚工程技术规范 GB/T 51183 农业温室结构荷载规范 NY/T 391 绿色食品 产地环境质量 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 NY/T 525 有机肥料 NY/T 1224 农用塑料薄膜安全使用控制技术规范 NY/T 1591 菊花切花种苗等级规格 NY/T 1657 花卉脱毒种苗生产技术规程 香石竹、菊花、兰花、补血草、满天星 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 饮用菊花 Drinkable Chrysanthemum 用于泡饮的多年生草本植物菊的头状花序。 3.2 脱毒种苗 （virus-free seedlings） 经RT-PCR检测方法鉴定，确认脱除了菊花B病毒（CVB）、番茄不孕病毒（TAV）、黄瓜花叶病毒（CMV） 等的脱毒核心材料（或脱毒苗）在隔离条件下生产的原原种、原种。 3.3 原原种 （breeder seed） 1 DB36/T 1654—2022 育种家选育的性状稳定纯正的用于繁殖原种的材料或种苗。 3.4 原种 （foundation seed） 由原原种繁殖的用于繁育生产用种的材料或种苗。 4 基本要求 4.1 产地环境 产地环境符合NY/T391的规定。 4.2 场地要求 选择排灌方便，地下水位较低，土层深厚、肥沃、疏松，3年内未种过茄科作物、5年内未种过菊 科植物的中性或微酸性土壤地块，且周围800m范围内无其它菊科和茄科植物种植。 4.3 化学农药使用 应符合GB/T 8321（所有部分）的要求。 4.4 肥料要求 应符合NY/T 496和 NY/T 525的要求。 5 网室建造与隔离 大棚所有通风处安装60目防虫网。大棚搭建应符合GB/T 51057 和GB/T 51183要求，大棚覆盖薄膜 应符合NY/T1224要求。大棚入口处宜配套缓冲间，田间操作人员进入防虫大棚温室、网室应更换工作 衣和鞋具。 6 原原种繁殖 6.1 材料和培养基准备 选具有繁育品种典型性状、生长健壮的植株，至光照培养箱中采用变温升温的方式进行热处理， 在日温/夜温分别为26 ℃/20 ℃下培养2d，每2d昼/夜温度分别升高2 ℃、直至38 ℃/30 ℃下培养40d， 取高温培养长出的茎段，剪去叶片，留取心叶或腋芽，放在烧杯中，用肥皂水冲洗干净，再用自来水 冲洗1h。滤干，移入无菌操作台，用20%的次氯酸钠灭菌8min～10min，取出后用无菌水冲洗3～5次待 用。 将制备好的MS+6-BA0.1mg/L培养基溶液分装于培养瓶，每瓶30ml，瓶口盖紧瓶盖。在121 ℃，1.1 MPa条件下灭菌20min，冷却后放入无菌操作台待用。 6.2 分化和继代培养 在无菌条件下，在解剖镜下剥取已灭菌材料的生长点0.3mm～0.5mm，接种到已灭菌的培养基上， 置于26℃，光强2000lx～3000lx，光照时间16h/d条件下培养，一周左右茎尖转绿并萌动，20d～30d形 成带芽茎段。 2 DB36/T 1654—2022 在无菌条件下将已分化的带芽茎段剪成小段，每段带1～2个腋芽，转入培养基（MS+6-BA0.1mg/L） 中进行增殖，3～4周后获30～40个带腋芽芽段。 6.3 病毒检测 取继代培养壮芽或叶片提取RNA，经RT-PCR检测方法鉴定，没有病毒宜继续培养，脱毒不彻底应弃 之不用。具体操作见附录A。 6.4 生根培养、炼苗及移栽管理 6.4.1 生根培养 将继代培养的茎段转入生根培养基（MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L）诱导生根，培养温度25℃～ 26℃，3～4周后95%均生根。 6.4.2 炼苗 瓶苗株高6cm～7cm，5～6片平展叶，生根5条以上3cm～4cm长的根时即可炼苗，幼苗炼苗1d～2d 后，定植在营养钵或苗床，于具60目防虫网的防虫网室或防虫温室内进行培育。 6.4.3 移栽管理 原原种采用9cm×9cm营养钵或苗床移栽，珍珠岩+蛭石+泥炭按体积比1︰1︰1的比例混合做基质， 移栽前用广谱保护性杀菌剂喷洒消毒。移栽后浇透定根水，以后保持基质70%的持水量，空气湿度保持 在80%～90%。太阳光强时要注意采用遮阳网遮荫。当植株发新叶后，逐步恢复自然光照，并进行叶面 施肥。气温不足时采取小拱棚膜和大棚相结合的双膜覆盖方式。白天保持25℃～26℃，夜间18℃～ 20℃。成活后白天保持25℃～27℃，夜间16℃～18℃，注意控水降温，防止幼苗徒长。移栽前一周注 意揭膜通风炼苗。 7 原原种鉴定 随机抽取每批次脱毒苗5～10株，以其母株为对照种植至开花。观察比较其主要生物性状，与母株 无差异者则可确认为原原种，有差异则淘汰。 8 原种网室繁殖 8.1 环境要求 原种繁育田要求育苗环境除应符合NY/T 391的规定外，要选择排灌方便、地下水位较低，地势高 燥，土层深厚、肥沃、疏松，阳光充足，通风条件好，3年内未种过茄科植物、5年内未种过菊科植物 的中性或微酸性土壤地块，且周围800m范围内无其它菊科和茄科植物种植。 8.2 苗床整理与消毒 8.2.1 苗床整理 育苗地于冬前深耕晒垡，每667平方米施入完全腐熟的农家肥500kg，扦插前一周左右平整土地， 清除杂草，畦面做到平、细、碎。育苗畦高25cm～30cm，畦面宽100cm，畦间距40cm。苗床四周开宽 50cm的深沟，便于排水。 3 DB36/T 1654—2022 8.2.2 苗床消毒 苗床先利用太阳光暴晒消毒，均匀喷洒广谱杀菌剂和灭线剂至畦面上预防杂菌和根结线虫病，再 每平方米用茶枯饼0.03kg杀灭地下害虫。在整平的畦面上均匀铺上5cm～10cm厚的河沙。 8.3 剪顶扦插 原种母株定植行株距应为45cm×45cm，从炼苗移栽成活的原原种上取健壮枝条扦插于苗床上，于 网室中扩繁。当原种母株长到7～8片叶时，从基部留3～4片叶处剪下顶芽进行扦插。 8.4 田间管理 在原种基地扩繁种苗应周年进行，当温度低于0℃时，应搭小拱棚，盖上薄膜保温。当母株苗越冬 后，要及时掀开薄膜，中耕除草，松土保墒。苗高7cm～8cm时，要开沟施1次复合肥。施用肥料应符合 NY/T 496 和 NY/T 525 规定。具体田间管理参照NY/T 1657操作，经过一年生产和集中繁育，繁育出健 壮原种苗。 9 质量检测 脱毒原种苗质量检测参照NY/T 1591中5.1.3进行抽样检查，并按照NY/T 1591中5.2的内容进行检 测，确定种苗的质量等级。 A 4 DB36/T 1654—2022 BA 附 录 A （规范性） RNA 病毒的反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法 A.1 主要仪器设备与试剂、耗材 表 A.1 各步骤主要仪器设备与试剂、耗材 步骤/类别 主要仪器设备 高压灭菌锅