(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211124772.7 (22)申请日 2022.09.15 (71)申请人 浙江经贸职业 技术学院 地址 310000 浙江省杭州市下沙学林街280 号 (72)发明人 牛灿杰　 (74)专利代理 机构 浙江杭州金通专利事务所有 限公司 3 3100 专利代理师 金杭 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 一种用于强化淀粉类食品的多维生素检测 方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于强化淀粉类食品的 多维生素检测方法， 包括以下步骤1)酶解； 2)样 品提取； 3)色谱分析； 4)样品定性 分析； 5)样品定 量分析， 标准溶液配制， 以标样响应峰面积作为 纵坐标， 标样浓度为横坐标， 采用外标法定量， 建 立标准工作液的标准曲线， 对 标准工作液和样液 等体积参插进样， 测定标准工作液和样液中维生 素响应值均在仪器检测的线性范围内。 本发明采 用合适的样品酶解方法， 通过一个前处理方法实 现， 减少前处理时间并减少了维生素的损失， 可 准确快速的进行大批量样品的检测； 优化流动 相、 梯度洗脱程序， 使得这些化合物可 以一次性 实现分离和定量， 减少了不同体系流动相的配 制， 改善了易丢峰、 鬼峰、 分叉峰、 拖尾峰的现象。 权利要求书1页 说明书8页 附图4页 CN 115469031 A 2022.12.13 CN 115469031 A 1.一种用于强化淀粉类食品的多维生素检测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 1)酶解， 将样品， BHT， α ‑淀粉酶， 一级水按质量比10:1:1:80混合， 并在 45～70℃水浴中 振荡酶解15～ 90min； 2)样品提取， 取步骤1)获得的酶解液， 调节pH至1.6～1.8， 放置1.5～3min后， 调节pH至 4.4～4.6， 充分 混合后， 超声提取8～12mi n， 转移定容至10 0mL容量瓶， 过0.2 2 μm水膜， 上机； 3)色谱分析， 将步骤2)获得的上机液经高效液相色谱 ‑二极管阵列检测器串联荧光检 测器联用法测定， 其中色谱柱： 安捷伦ZORBAX  Eclipse XDB C18(250mm ×4.6mm×5 μm)； 柱 温35℃； 流动相： A相， 十二烷基硫酸钠溶液， B相， 乙腈； 梯度洗脱条件： 0～5.0min， B相： 10％； 5.0min～2 0min， B相： 10％～ 62％； 20.1～2 5.0min， B相62％～10％； 2 5.1～28.0min， B 相10％， 后续程序增加平衡时间5min； 流速： 1mL/min； 进样量： 10 μL； 检测器为DAD串联FLD， DAD检测波长为261nm， 245nm， 荧光检测器： 0～10.0min， 激发波长462nm， 发射波长522nm， 10.0～28.0min， 激发波长2 93nm， 发射波长462nm； 4)样品定性分析， 根据步骤3)色谱分析得到的保留时间及特征光谱图与标样的保留时 间及特征光谱图比对， 确定含有相应维生素； 5)样品定量分析， 标准溶液配制， 分别准确称取维生素B1、 B2、 烟酸、 烟酰胺、 盐酸吡哆 醛、 双盐酸吡哆胺、 盐酸吡哆醇标准物质， 用0.01mol/L盐酸水溶液溶解并定容， 配制成标准 储备液， 再用水逐级稀释成系列混合标准工作液， 以标样响应峰面积作为 纵坐标， 标样浓度 为横坐标， 采用外标法定量， 建立标准工作液的标准曲线， 对标准工作液和样液等体积参插 进样， 测定标准工作液和样液中维生素响应值均在仪器 检测的线性范围内。 2.根据权利要求1所述的用于强化淀粉类食 品的多维生素检测方法， 其特征在于： 所以 步骤1)中α ‑淀粉酶的酶活力≥1.5 μ/mg； BHT为分析 纯及以上。 3.根据权利要求1所述的用于强化淀粉类食 品的多维生素检测方法， 其特征在于： 所述 步骤5)标准储 备液中维生素B1的浓度为100mg/L， 维生素B2的浓度为50mg/L， 烟酸的浓度为 500mg/L， 烟酰胺的浓度为500mg/L， 盐酸吡哆醛的浓度为100mg/L， 双盐酸吡哆胺的浓度为 100mg/L， 盐酸吡哆醇的浓度为10 0mg/L。 4.根据权利要求1所述的用于强化淀粉类食 品的多维生素检测方法， 其特征在于： 所述 样品为营养强化米粉或为强化馒头或为强化谷物或为 其两种及以上的组合物。 5.根据权利要求1所述的用于强化淀粉类食 品的多维生素检测方法， 其特征在于： 所述 步骤1)中混合物在6 0℃水浴中振荡酶解 45min。 6.根据权利要求1所述的用于强化淀粉类食 品的多维生素检测方法， 其特征在于： 所述 步骤2)中利用盐酸水 溶液调节pH 至1.7； 利用氢 氧化钠水 溶液调节pH 至4.5。 7.根据权利要求1所述的用于强化淀粉类食 品的多维生素检测方法， 其特征在于： 所述 步骤3)中十二 烷基硫酸钠为色谱纯及以上。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115469031 A 2一种用于强化淀 粉类食品的多维生素检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于检测领域， 尤其是涉及一种用于强化淀粉类食品的多维生素检测方 法。 背景技术 [0002]随着经济水平的逐渐提升， 人们对食品的需求逐渐从 “吃得放心 ”转化为“吃得营 养”。 营养强化淀粉类食品作为营养强化食品， 如营养强化米粉， 营养强化面条等 发展迅速， 人们越来越关注 其营养成分， 然 营养素检出不合格的情况较多。 水溶性 维生素B1、 B2、 B3(烟 酸、 烟酰胺)、 B6(吡哆醛、 吡哆醇、 吡哆胺)等作为重要的营养成分， 对其检测具有重要意 义。 [0003]目前， 针对水溶性维生素的国家标准检测方法多为单一维生素的检测， 前处理步 骤繁琐， 不易操作， 检测周期 长。 多种水溶性 维生素同时检测的研究方法主要为液相色谱串 联质谱法和液相色谱法。 液相色谱串联质谱法， 仪器价格昂贵、 操作难度较大、 维护成本高、 一般实验室难以配备， 不易普及。 高效液相色谱法则主要采用紫外检测器进行检测， 部 分维 生素检出限较高， 干扰严重。 研究 的样品基质以奶粉和保健食品居多， 且对于维生素B6的测 定多只检测其中的一种， 而Yaman  M等的研究表明， 淀粉类食品中含有吡哆醛、 吡哆醇和吡 哆胺形式的维生素B6。 维生素B1、 B2、 B3(烟酸、 烟酰胺)、 B6(吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺)作为强 化类食品的重要组成部分， 其在营养强化淀粉类食品中同时检测的方法并未 见报道。 [0004]在实际强化淀粉类样品检测中， 由于维生素具有不稳定性且 强化淀粉类食品中水 溶性维生素的检测需要经过酶解过程， 如何保证酶解过程高效且尽可能降低维生素损失是 获得准确检测方法的重点， 然目前未见相关研究。 同时由于不同维生素的化学性质有区别， 如何改善提取液、 流动相、 梯度洗脱条件、 结合检测 器的优势， 以实现同一体系检测， 高效、 准确、 高灵敏度、 低干扰、 高通量是方法建立的需要突破的重点， 目前针对强化淀粉类食品 中多种水 溶性维生素的相关研究尚匮乏。 发明内容 [0005]为了克服现有技术的不足， 本发明提供一种可以同时检测强化淀粉类食品中7种 水溶性维生素， 检测速度快的用于强化淀粉类食品的多维生素检测方法。 [0006]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是： 一种用于强化淀粉类食品的多维生 素检测方法， 包括以下步骤： [0007]1)酶解， 将样品， BHT， α ‑淀粉酶， 一级水按质量比10:1:1:80混合， 并在45～70℃水 浴中振荡酶解15～ 90min； [0008]2)样品提取， 取步骤1)获得的酶解液， 调节pH至1.6～1.8， 放置1.5～3min后， 调节 pH至4.4～4.6， 充分混合后， 超声提取8～12min， 转移定容至100mL容量瓶， 过0.22 μm水膜， 上机； [0009]3)色谱分析， 将步骤2)获得的上机液经高效液相色谱 ‑二极管阵列检测器串联荧 光检测器联用法测定， 其中色谱柱： 安捷伦ZORBAX  Eclipse XDB C18(250mm ×4.6mm×5μ说　明　书 1/8 页 3 CN 115469031 A 3