(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211169512.1 (22)申请日 2022.09.26 (71)申请人 北京金域医学检验实验室有限公司 地址 100015 北京市朝阳区京顺 东街6号院 26号楼1层101、 2层201、 3层301、 4层 401 (72)发明人 孔许净　王涵　蔡素素　陈宝荣　 樊晓敏　白蕊　孙慧颖　彭宝生　 (74)专利代理 机构 北京领科知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 11690 专利代理师 张丹 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种生物体液样本中多种类固醇激素的提 取方法 (57)摘要 本发明涉及一种生物体液多种类固醇激素 的提取方法， 所述方法包括以下步骤： S1： 生物体 液中加入内标工作液， 混匀， 制得含有内标工作 液的生物体液； S2： 向S1的含有内标工作液的生 物体液中加入萃取剂， 得到混合溶剂， 混匀后离 心， 使混合溶剂分层为水相与有机相； S3： 转移有 机相， 氮吹至近干； S4： 采用溶剂复溶， 得到检测 样品。 本发明的方法操作简单， 试剂种类和使用 量少， 不仅节省成本而且减少对环境的影响； 本 发明的方法通量高， 大批量样本分析时间短， 不 同基质的生物体液样本可同时进行前处理， 误差 小， 基质效应的影响小， 采用本发明处理后的样 品可用于 类固醇类 激素的检测。 权利要求书2页 说明书9页 附图17页 CN 115236246 A 2022.10.25 CN 115236246 A 1.一种生物体液中多种类固醇激素的提取 方法， 其特 征在于， 所述方法包括： S1： 生物体液中加入内标工作液， 混匀， 制得 预处理样本； S2： 向S1的含预处理样本中加入萃取剂， 得到混合溶剂， 混匀后离心， 使混合溶剂分层 为水相与有机相； S3： 转移有机相， 氮吹至 近干； S4： 采用溶剂复溶， 得到检测样品； 所述内标工作液由碳代和/或氘代类固醇激素与体积比3 0~45%甲醇水 溶液配制而成； 所述内标工作液与生物体液的体积比为1:20  ~ 1:10； 所述萃取剂与生物体液的体积比为： 3:1  ~ 8:1； 所述复溶采用如下 溶剂： 甲醇水混合溶 液或乙腈水混合溶 液； 所述类固醇激素包括： 孕烯醇酮、 孕酮、 17 ‑羟孕烯醇酮、 17 ‑羟孕酮、 11 ‑脱氧皮质酮、 皮 质酮、 18‑羟皮质酮、 醛固酮、 11 ‑脱氧皮质醇、 21 ‑脱氧皮质醇、 皮质醇、 18 ‑羟皮质醇、 18 ‑氧 皮质醇、 可的松、 脱 氢表雄酮、 硫酸脱氢表 雄酮、 雄烯 二酮、 11‑羟雄烯二酮、 11‑酮雄烯二酮、 睾酮、 双氢睾酮、 1 1‑羟睾酮、 1 1‑酮睾酮、 表睾酮、 雄酮、 表雄酮、 雌酮、 雌二醇和雌三醇。 2.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述内标工作液与生物体液的体积比为1: 10； 和/或， 所述萃取剂与生物体液的体积比为： 5:1。 3.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述萃取剂选自乙酸乙酯、 甲基叔丁基醚、 正 己烷中一种或多种的混合溶 液。 4.如权利要求3所述的方法， 其特 征在于， 所述萃取剂为乙酸乙酯。 5.如权利要求3所述的方法， 其特 征在于， 所述萃取剂用量 为0.8~1.5mL。 6.如权利要求3所述的方法， 其特 征在于， 所述萃取剂用量 为1mL。 7.如权利 要求1所述的方法， 其特征在于， 所述体液包括： 血浆、 血清、 尿液、 唾液、 乳汁、 脑脊液、 泪液。 8.如权利要求7 所述的方法， 其特 征在于， 所述体液选自： 血浆、 血清。 9.如权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述S1的混匀时间为1~30min。 10.如权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述S1的混匀时间为2mi n。 11.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述S2的混匀条件为： 混匀时间2.5min~ 30min， 混匀转速为15 00rpm~3000rpm； 所述S2的离心的条件为： 温度为2~5℃， 转速为12000rpm~13000rpm， 时间为5min~ 15min。 12.如权利要求1 1所述的方法， 其特 征在于， 所述S2的离心的条件为： 温度为 4℃。 13.如权利要求9或11所述的方法， 其特征在于， 所述S2的混匀条件为： 以2000rpm混匀 5min； 和/或， 所述S2的离心的条件为： 以4℃， 转速为120 00rpm， 时间为5mi n。 14.如权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述S3的氮吹条件为： 氮吹温度25~50℃； 氮吹时间5~30min。 15.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述S3的氮吹条件为： 氮吹温度40℃； 氮吹 时间10mi n。 16.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述S4的溶剂为： 甲醇和水混合溶液、 乙腈权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115236246 A 2和水的混合溶 液； 和/或， 所述S4复溶时间为： 1~5min。 17.如权利要求16所述的方法， 其特征在于， 所述复溶试剂为体积比20%~50%甲醇水溶 液或体积比20%~50%乙腈水 溶液。 18.如权利要求17所述的方法， 其特征在于， 所述复溶试剂为体积比30%的甲醇水混合 溶液或体积比45%的 甲醇水混合溶 液。 19.如权利要求16所述的方法， 其特 征在于， 所述S4复溶时间为2mi n。 20.一种生物体液多种类固醇激素的检测方法， 其特征在于， 所述检测方法包括： 取权 利要求1~19任一项所述的方法制备得到的检测样品， 采用液相色谱 ‑串联质谱法对所述检 测样品进行检测； 基于液相色谱 ‑串联质谱法确定生物体液中类固醇激素的种类和/或浓 度。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115236246 A 3