(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211319161.8 (22)申请日 2022.10.26 (71)申请人 苏州颐坤生物科技有限公司 地址 215000 江苏省苏州市苏州工业园区 桑田街218号14楼101单 元 (72)发明人 赵妍　陈怡昭　王春燕　孙美珊　 冯涛　邹浩　 (74)专利代理 机构 北京精金石知识产权代理有 限公司 1 1470 专利代理师 尉月丽 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种检测血清和血浆中脂溶性维生素的试 剂盒及检测方法 (57)摘要 本发明提供了一种检测血清和血浆中脂溶 性维生素的试剂盒及检测方法， 涉及维生素检测 技术领域， 本发 明提供的检测方法是将样本通过 试剂盒进行前处理， 使用液相色谱串联质谱， 通 过内标法准确定量分析血清和血浆样本中的脂 溶性维生素。 检测的维生素主要包括维生素A、 维 生素E、 25‑羟基维生素D2和2 5‑羟基维生素D3。 本 发明提供的检测方法， 前处理操作 简单， 耗时短， 能够提高分辨率， 具有高特异性以及高灵敏度的 特点， 能有效提高检测通 量。 权利要求书1页 说明书13页 附图6页 CN 115524425 A 2022.12.27 CN 115524425 A 1.一种脂溶性维生素的检测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1： 将血清和血浆样本进行 前处理， 得处理液； S2： 使用液相色谱串联质谱， 通过内标法， 准确定量分析处 理液中的脂溶性维生素； 所述的色谱的流动相A和B中分别加入流动相添加剂1和流动相添加剂2； 所述的流动相添加剂1为甲酸铵， 所述的流动相添加剂2为甲酸。 2.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述的步骤S2中液相色谱的条件为： 流动相A是甲酸 ‑甲酸铵水 溶液， 流动相B是甲酸 ‑甲醇溶液。 3.根据权利要求2所述的检测方法， 其特征在于， 所述的液相色谱的梯度洗脱参数为： 0min， 70％流动相B； 0 ‑0.5min， 70％流动相B； 0.5 ‑1.5min， 70 ‑85％流动相B； 1.5 ‑2min， 85％ 流动相B； 2 ‑4min， 85‑100％流动相B； 4 ‑5.9min， 100 ％流动相B； 5.9 ‑6min， 100 ‑70％流动相 B； 6‑6.5min， 70％流动相B。 4.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述的步骤S2中质谱的条件为： 在电 喷雾电离模式下， 采用多反应监测模式MRM检测。 5.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述的步骤S1中前处理的试剂包括萃 取液和复溶 液。 6.根据权利要求5所述的检测方法， 其特征在于， 所述的萃取液为甲基叔丁基醚， 所述 的复溶液为甲醇。 7.根据权利要求5所述的检测方法， 其特征在于， 所述的试剂还包括FV工作液1 ‑5、 FV  LQC溶液、 FV HQC溶液和内标工作液。 8.根据权利要求7所述的检测方法， 其特征在于， 所述的FV工作液1 ‑5、 FV LQC溶液、 FV   HQC溶液均为5％BSA溶 液， 所述的内标工作液为甲醇。 9.一种采用权利要求5 ‑8任一项所述的检测方法对脂溶性维生素进行前处理的试剂 盒， 其特征在于， 所述的试剂盒的处理方法为： 将样本平衡至室温， 加入萃取液， 离心， 氮气 吹干， 加入复溶 液， 离心后得 上清液。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115524425 A 2一种检测血清和血浆中脂溶性维生素的试剂盒及检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及维生素检测技术领域， 具体涉及一种检测血清和血浆中脂溶性维生素 的试剂盒及检测方法。 背景技术 [0002]维生素是维持人和动物正常生理功能的重要物质， 这类物质必须从食物中获得， 在人类的生长发育和代谢中发挥着重要的作用。 维生素分为水溶性 维生素和脂溶性 维生素 两大类， 其中脂溶性维生素主 要包括维生素A(V A)、 维生素D(VD)和维生素E(VE)等。 [0003]维生素A与视力、 生长 发育、 免疫系统相关， 缺乏维生素A会引起夜盲症， 干眼症， 皮 肤病， 免疫功能低下， 儿童生长发育迟缓等； 维生素D是一种脂溶性维生素， 主要由维生素 D2、 维生素D3两种活性 成分组成， 维生素D在肝脏内被转化为25 ‑羟基维生素D， 临床上以25 ‑ 羟基维生素D作为评价体内维生素D营养水平的指标； 维生素E是重要的生物氧化剂， 缺乏维 生素E会引起贫血、 免疫低下、 神经系统退 行性病变。 [0004]脂溶性维生素的传统检测方法有比色法、 紫外失活分光光度法、 荧光法及微生物 法等。 这些方法只能测定某一种维生素 的含量， 操作步骤复杂， 血样样本量大， 且结果不稳 定,干扰因素多， 因此需要建立 一种灵敏、 准确、 快速的分析 方法。 [0005]中国发明专利CNCN114487209A公开了一种基于磁性固相萃取的脂溶性维生素的 液相色谱串联质谱检测方法方法， 该方法可以高灵敏度地、 特异性地一次性检测出维生素 A、 25‑羟基维生素D2、 25 ‑羟基维生素D3、 维生素E。 但是由于前处理比较复杂， 需要自动化仪 器， 成本比较高， 并且步骤繁琐， 耗时较长 。 [0006]中国发明专利CN112557539A公开了一种同时测定血浆中维生素A、 维生素E和25 ‑ 羟基维生素D的方法， 该发明采用液相色谱串联质谱法进行检测， 本发明方法高效准确、 线 性范围广、 重 现性良好， 而且样本使用量少、 患者依从性好、 检测成本低， 具有良好的临床 应 用前景。 但是标准曲线 未和样本同时进 行前处理， 容易引起较大实验误差， 不利于样本准确 检测。 [0007]本发明公开一种用液相色谱串联质谱技术检测脂溶性维生素， 前处理使用液液萃 取的方法， 方法简单， 效率极高， 时间较短， 优势突出。 发明内容 [0008]本发明针对现有技术存在的问题， 提供了一种检测血清和血浆中脂溶性维生素的 检测方法， 前处 理采用试剂盒， 使用液 液萃取的方法， 方法简单， 效率高， 具 备市场竞争力。 [0009]为实现上述目的， 本发明采用的技 术方案如下： [0010]一方面， 本发明提供了一种脂溶性维生素的检测方法。 [0011]具体地， 所述检测方法包括以下步骤： [0012]S1： 将血清和血浆样本进行 前处理， 得处理液； [0013]S2： 使用液相色谱串联质谱， 通过内标法， 准确定量分析处理液中的脂溶性维生说　明　书 1/13 页 3 CN 115524425 A 3