(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211295145.X (22)申请日 2022.10.21 (71)申请人 云南中烟工业有限责任公司 地址 650231 云南省昆明市五华区红锦路 367号 (72)发明人 蒋薇　洪俊丽　郑雅妮　李振杰　 戴寅　刘春波　刘志华　司晓喜　 张凤梅　朱瑞芝　苏钟壁　姚力文　 吴麒昊　杨继　唐石云　 (74)专利代理 机构 北京市领专知识产权代理有 限公司 1 1590 专利代理师 陈有业　任永利 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01)B01J 20/26(2006.01) B01J 20/28(2006.01) B01J 20/30(2006.01) (54)发明名称 一种富集和检测烟草中4-甲基亚硝胺基-1- (3-吡啶基)-1-丁酮的方法 (57)摘要 本发明公开了一种富集检测烟草中4 ‑甲基 亚硝胺基 ‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁酮(NNK)的方法， 包括以下步骤： (1)制备烟草检测液； (2)富集 NNK： 采用磁性树枝状分子印迹识别吸附材料分 离并富集烟草步骤(1)得到的甲醇溶液中的NNK； (3)检测： 采用高效液相 色谱法检测NNK。 本发明 的方法可 以选择性富集和检测烟草中N ‑亚硝胺 类物质NNK， 具有灵敏度高、 选择性好、 分析速度 快、 重现性好的优点。 在烟草质量控制和成分分 析中有广阔的应用前 景。 权利要求书1页 说明书8页 附图5页 CN 115453013 A 2022.12.09 CN 115453013 A 1.一种富集检测烟草中4 ‑甲基亚硝胺基 ‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁酮(NNK)的方法， 其特征 在于， 包括以下步骤： (1)制备烟草检测液： 将烟草加入含有乙酸铵的水溶液中， 超声处理一段时间， 收集上 清液， 经微 孔滤膜过 滤得到滤液， 氮气吹干， 用甲醇复溶 得到甲醇溶 液； (2)富集NNK： 采用磁性树枝状分子印迹识别吸附材料分离并富集步骤(1)得到的甲醇 溶液中的NNK； (3)检测： 采用高效液相色谱法检测N NK。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)烟草与含有乙酸铵的水溶液的质 量比为1:(5 ‑500)； 超声提取5 ‑120分钟； 微 孔滤膜的孔径为0.1 ‑0.5 μm。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤(2)所述磁性树枝状分子印迹识别吸 附材料制备步骤为： 将Fe3O4纳米颗粒外包覆SiO2后氨基硅烷偶联化修饰， 得到氨基修饰的 Fe3O4@SiO2纳米粒； 然后加 入醛功能试剂与1 ‑5代聚酰胺 ‑胺树枝的甲醇溶液； 外磁场分离， 洗涤干燥； 然后加入虚拟模板 分子N‑(羟甲基)烟酰胺、 交联剂、 引发剂和功能单体进 行分子 印迹层的合成； 磁性分离， 洗脱虚拟模板分子， 干燥； 即得到所述磁性树枝状分子印迹识别 吸附材料。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤(2)的富集步骤为： 甲醇溶液中加入磁 性树枝状分子印迹识别吸附材料， 室温振摇一段时间， 外磁场分离； 向磁性树枝状 分子印迹 识别吸附材料加入甲醇 ‑乙酸洗脱液(v:v＝9:1)超声15分钟； 外磁场分离， 获取上清液， 氮 气吹干； 然后使用0.1wt％乙酸铵甲醇溶 液复溶。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)的液相 条件为， 色谱柱： C18柱(5μ m， 150mm×4.6mm)； 流速： 1.0mL/min； 柱温： 25 ‑50℃； 进样量： 10 μL； 洗脱方式： 梯度洗脱； 检 测器： 二极管阵列检测器(DAD)， 全波长扫描(190 ‑800nm)， 检测波长为23 0nm。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 梯度洗脱条件为： 0 –4.5min， 40wt％流动相 A+60wt％流动相B； 4.5 –10.0min， 5wt％流动相A+95wt％流动相B。 7.根据权利 要求6所述的方法， 其特征在于， 流动相A为0.08wt％乙酸铵水溶液， 流动相 B为0.1wt％乙酸铵甲醇溶 液。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115453013 A 2一种富集和检测烟草中4 ‑甲基亚硝胺基 ‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁 酮的方法 技术领域 [0001]本发明专利属于分析化学领域， 具体涉及一种富集和检测烟草中4 ‑甲基亚硝胺 基‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁酮(NNK)的分析 方法。 背景技术 [0002]烟草及烟草制品中的低丰度N ‑亚硝胺类物质与复杂基质成分共存， 富集与检测存 在样品处 理方法繁杂和缺乏选择性的问题， 难以达 到针对性 富集与简便快捷的检测要求。 [0003]现有技术中针对烟草NNK的分析检测研究， 如专利CN108956802A和专利 CN110646536A的检测方法， 为该目标物的检测提供了易于推广应用的思路。 但是， 上述专利 CN110646536A使用的分析方法， 需要较长的时间和复杂的仪器设备； 专利CN108956802A缺 乏对某一具体目标物的选择识别性， 在烟草这类复杂基质背 景的样品分析中， 易受到干扰， 影响测定的准确 性和灵敏度。 因此需要建立一个选择性富集和简便快捷的检测NNK的分析 方法。 [0004]分子印迹聚合物(molecularly  imprinted  polymers， MIPs)具有预定性、 识别性 以及广泛使用性， 在食品药品和环境污染物或残留物的分离、 富集和分析中的应用发展迅 速。 MIPs对特定目标化合物空间结构的 “记忆”效应和对作用位点的 “识别”作用， 能够高选 择性富集分离复杂体系中的目标分子。 此外， 与常规的 “本体聚合 ”相比，“表面印迹”聚合技 术使得残留模板大大减少， 增加有效 “印迹”容量， 减少传质阻力， 具有比表面积大、 吸附量 高、 吸附和解吸动力学良好 等特性。 [0005]树枝状聚合物(dendrimers)是一类新型高分子纳米材料， 它的潜在 应用价值已引 起科学家的广泛关注。 其结构规整、 质量可控、 通畅的分子骨架结构内外都能富含大量功能 基团， 并可针对MIPs纳米结构需求进行功能化设计。 近年来基于磁性纳米材料表面树状纳 米结构的MIPs研究报道较少。 磁性材料使得富集过程极为简便， 省去、 离心、 过滤等繁杂操 作。 将磁性树枝状分子印迹富集 目标物和高效液相检测相结合， 可更好满足产品质量控制 的需求。 为此提出本发明。 发明内容 [0006]本发明提供了一种富集和检测烟草中4 ‑甲基亚硝胺基 ‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁酮  (NNK)的方法。 本发明的方法创新性地优化了目标物 富集方法和液相检测方法， 实现了烟草 中NNK的高选择性、 高灵敏度、 低干扰、 简便快捷的检测分析。 [0007]本发明的目的是通过以下技 术方案来实现的。 [0008]一种富集检测烟草中4 ‑甲基亚硝胺基 ‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁酮(NNK)的方法， 包括 以下步骤： [0009](1)制备烟草检测液： 将烟草加入含有乙酸铵的水溶液中， 超声处理一段时间， 收 集上清液， 经微 孔滤膜过 滤得到滤液， 氮气吹干， 用甲醇复溶 得到甲醇溶 液；说　明　书 1/8 页 3 CN 115453013 A 3