(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211116059.8 (22)申请日 2022.09.14 (71)申请人 郑州大学第一附属医院 地址 450000 河南省郑州市二七区建 设东 路1号 (72)发明人 邢晗　杨晶　王培乐　刘冬梅　 秦智莹　 (74)专利代理 机构 郑州亦鼎知识产权代理事务 所(普通合伙) 41188 专利代理师 宋文岩 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种同时测定泊沙康唑、 伏 立康唑和维奈克 拉血药浓度的方法 (57)摘要 本发明属于医学检验技术领域， 具体公开了 一种同时测定泊沙康唑、 伏立康唑和维奈克拉血 药浓度的方法及分析试剂盒。 本发 明的方法通过 选择性、 线性、 准确度、 精密度、 基质效应、 回收 率、 残留效应、 稳定性、 稀释效应等方法学验证， 完全满足临床样本的检测要 求， 操作简便、 高效， 检测结果准确、 可靠， 可 以直接运用于临床患者 血浆样本的检测分析及药代动力学研究。 与现有 技术相比， 具有以下优点： (1)前处理操作简单， 血样用量少， 成本低； (2)检测时间短， 准确度和 灵敏度高， 适用于临床检验； (3)采用内标法定 量， 且采用氘代试剂作为内标， 准确度和稳定性 更高。 本发明的分析试剂盒也具有定性可靠、 定 量准确、 灵敏度高、 重复性 好等优点。 权利要求书2页 说明书12页 附图5页 CN 115480009 A 2022.12.16 CN 115480009 A 1.一种同时测定泊沙康唑、 伏立康唑和维奈克拉血药浓度的方法， 其特征在于： 包括以 下步骤： (1)样本前处 理 将血浆样本与内标、 沉淀剂混合， 沉淀蛋白后得到待测溶 液； (2)高效液相色谱 ‑串联质谱分析 取待测溶液进行高效液相色谱 ‑串联质谱分析， 经计算后得到泊沙康唑、 伏立康唑和维 奈克拉的血 药浓度； 所述高效液相色谱分析条件为： Shimadzu  VP‑ODS C18色谱柱， 规格： 150mm ×2.0mm， 4.6 μm； 0.1％v/v甲酸水溶液为流动相 A， 含0.1％v/v甲酸的甲醇溶液为流动相B， 采用梯度 洗脱程序， 流速为0.40mL/mi n； 柱温40℃； 进样量10 μL。 2.根据权利要求1所述的同时测定泊沙康唑、 伏立康唑和维奈克拉血药浓度的方法， 其 特征在于： 步骤(1)中， 所述内标为维奈克拉 ‑D8、 伏立康唑 ‑D3、 泊沙康唑 ‑D4； 和/或， 步骤(1)中， 所述 沉淀剂为甲醇或乙腈， 优选为甲醇。 3.根据权利要求1所述的同时测定泊沙康唑、 伏立康唑和维奈克拉血药浓度的方法， 其 特征在于： 步骤(2)中， 所述梯度洗脱程序为： 0 ‑1.99min， 90％流动相 A(余量为流动相B， 下 同)； 1.99 ‑2.0min， 90％流动相A →35％流动相A； 2.0 ‑3.5min， 35％流动相A →5％流动相A； 3.5‑5.5min， 5％流动相A； 5.5 ‑5.6min， 5％流动相A →90％流动相A； 5.6 ‑6.5min， 90 ％流动 相A。 4.根据权利要求1所述的同时测定泊沙康唑、 伏立康唑和维奈克拉血药浓度的方法， 其 特征在于： 步骤(2)中， 所述质谱分析条件为： 电喷雾离子化电离源， 采用正离子模式； 维奈 克拉的离子对为869.50 →321.50， DP  80V， CE 55V； 伏立康唑的离子对为350.20 →281.00， DP 35V， CE 40V； 泊沙康唑的离子对为701.30 →127.00， DP  80V， CE 90V； 内标维奈克拉 ‑D8 的离子对为877.40 →329.70， DP  90V， CE 62V； 内标伏立康唑 ‑D3的离子对为353.20 → 284.00， DP  35V， CE 40V； 内标泊沙康唑 ‑D4的离子对为705.30 →131.00， DP  80V， CE90V； 离 子源温度500℃； 碰撞气4psi， 帘气35psi， 离子源气体1  60psi， 离子源气体2  60psi， 均为氮 气； 离子喷雾电压 5500V； 入口电压10V； 碰撞池出口电压15V。 5.根据权利要求1所述的同时测定泊沙康唑、 伏立康唑和维奈克拉血药浓度的方法， 其 特征在于： 所述方法还包括以下一个或多个步骤： 使用标准曲线 溶液绘制标准曲线， 使用质 控溶液进行质控检验。 6.根据权利要求5所述的同时测定泊沙康唑、 伏立康唑和维奈克拉血药浓度的方法， 其 特征在于： 所述标准 曲线溶液 的配制操作为： 将系列浓度的混合标准 曲线工作液分别与生 物基质、 内标和沉淀剂混合， 沉淀蛋白后得到系列浓度的标准曲线 溶液， 其中维奈克拉和伏 立康唑的浓度均依次为50， 100， 500， 1000， 2000， 5000， 10000ng/mL， 对应泊沙康唑的浓度依 次为25， 5 0， 250， 500， 1000， 2500， 5000ng/mL； 和/或， 所述绘制标准曲线的操作为： 取系列浓度的标准曲线溶液分别进行高效液相色 谱‑串联质谱分析， 以分析物血药浓度为X轴、 分析物峰面积与对应内标峰面积的比值f为Y 轴进行权 重线性回归分析， 得到标准曲线回归方程。 7.根据权利要求5所述的同时测定泊沙康唑、 伏立康唑和维奈克拉血药浓度的方法， 其 特征在于： 所述质控溶液的配制操作为： 将低、 中、 高3个浓度梯度的质控工作液分别与生物权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115480009 A 2基质、 内标和沉淀剂混合， 沉淀蛋白后得到低、 中、 高3个浓度的质控溶液； 所述低浓度质控 溶液中维奈克拉、 伏立康唑、 泊沙康唑的浓度分别为100ng/mL、 100ng/mL、 50ng/mL， 所述中 浓度质控溶液中维奈克拉、 伏立康唑、 泊沙康唑的浓度分别为1000ng/mL、 1000ng/mL、 500ng/mL， 所述高浓度质控溶液中维奈克拉、 伏立康唑、 泊沙康唑的浓度分别为8000ng/mL、 8000ng/mL、 40 00ng/mL； 和/或， 所述质控检验的操作为： 取低、 中、 高3个浓度的质控溶液分别进行高效液相色 谱‑串联质谱分析， 经计算后得到每个质控溶液中泊沙康唑、 伏立康唑、 维奈克拉的检测浓 度； 将检测浓度与质控溶 液的标准浓度进行准确度和精密度分析， 得到质控检验结果。 8.根据权利要求1所述的同时测定泊沙康唑、 伏立康唑和维奈克拉血药浓度的方法， 其 特征在于： 步骤(2)中， 所述计算为： 将分析结果代入标准曲线 回归方程中， 得到泊沙康唑、 伏立康唑和维奈克拉的血 药浓度。 9.一种使用 如权利要求1 ‑8中任一项所述的方法同时测定泊沙康唑、 伏立康唑和维奈 克拉血药浓度的分析试剂盒， 其特征在于： 所述分析试剂盒包括以下一种或多种组分： 含内 标的沉淀剂或者内标和沉淀剂， 流动相A和流动相B， 标准曲线工作液， 质控工作液。 10.根据权利要求9所述的同时测定泊沙康唑、 伏立康唑和维奈克拉血药浓度的分析试 剂盒， 其特 征在于： 所述分析 试剂盒还 包括色谱柱。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115480009 A 3